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流式细胞术检测淋巴细胞表面标?/p>

 

一、实验目?/p>

 

1.

了解流式细胞仪的组成?/p>

原理及应用:

初步了解流式细胞仪的工作元件及基本应用原

理;能够认识流式细胞术的应用,特别是常用的一些功能?/p>

 

2. 

熟悉用流式细胞术检测小鼠脾?/p>

T

细胞表面标志的基本流?/p>

 

3. 

学习并掌握流式细胞术结果的分析:能够基本看懂结果图,重点掌握“门”和“补

偿”两个概念?/p>

 

二、实验原?/p>

 

1.

 

流式细胞?/p>

?/p>

Flow 

Cytometry, 

简?/p>

FCM

?/p>

是一种可以快速?/p>

准确、客观,

并且同时

检测单个微?/p>

(通常是细胞)

的多项特?/p>

(多参数?/p>

的技术,

同时可以对特定群体加以分选?/p>

 

特点:可检测的样本种类多样,大小范围较广(0.2~50µm?/p>

;检测速度快,分析样本?/p>

大(快速、大量)

;细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏;采用激光作为激发光源,

保证其具有更好的单色性与激发效率;

利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术,

?/p>

证检测的灵敏度和特异性;

用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进

行数据处理分析,保证了检测速度

10000

个细?/p>

(

微粒

)/

秒与统计分析精确性?/p>

 

2. 

流式细胞仪组成及原理

 

Fluidics (

液流系统

)

——流体动力学聚焦样本形成单细胞流?/p>

 

鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液?/p>

主要作用是包裹样本流的周围,

保持样本流中

细胞处于喷嘴中心位置?/p>

防止其靠近孔壁而阻塞喷孔?/p>

匀速流动,

保证每个细胞通过激光照

射区的时间相等,从而得到准确的细胞荧光信息?/p>

 

Optics (

光学系统

)

——激发和收集光信号?/p>

 

激发系统包括:激光器、透镜和反射镜,将激光聚焦到检测区

 

收集系统包括:光学镜片和滤光片、光信号检测器

 

流式细胞仪收集的信号?/p>

?/p>

1

)散射光信号:细胞在液柱中与激光束相交时向周围

360

°

立体角方向散射的光线信号,它的强弱与细胞的大小、形状?/p>

胞内颗粒折射等有关,主要?/p>

为前向散射光

(

信号强弱与细胞体积大小成正比

)

和侧向散射光

(

检测细胞粒度和细胞内相?/p>

复杂?/p>

)

?/p>

FS-SS

图可对未染色的活细胞进行分析或分选,但不能分析表面分子(

2

)荧光信

号:

荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生?/p>

发射的荧光波长与激发光

波长不同?/p>

每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色,

通过波长选择通透性滤片,

可将?/p>

同波长的散射光和荧光信号区分开?/p>

送入不同的光电倍增管;

选择不同的单抗及染料就可?/p>

时测定一个细胞上的多个不同特征?/p>

 

Electronics 

(

电子系统

)

——数据处理系统,扩大信号,将光信号转化为电信号,处理

信号并存储于电脑?/p>

 

3.

流式步骤

 

第一步:

用带有不同荧光基团的抗体分别识别并结合细胞上不同抗原

(染色)

?/p>

第二步:

带有荧光的细胞一个接一个通过激光;

第三步:

不同荧光基团有不同发射光谱,

荧光染料?/p>

择原则:

必须能够被流式细胞仪上所配备的激光器所激发?/p>

激发光谱必须在仪器上滤光片?/p>

够接受的合适范围内?/p>

荧光素光谱的重叠应当尽量减少?/p>

第四步:

复杂的荧光信号被不同?/p>

色镜和滤光片分解;第五步:光电倍增管(

PMT

)将光信号变成电信号;第六步:模数变?/p>

器(

ADC

)进一步将模拟信号变成计算机能处理的数字信?/p>

 

4.

分选基本原?/p>

 

细胞悬液形成液流柱→压电晶体产生机械振动?/p>

流动室振动→液流断裂成液滴→如果?

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流式细胞术检测淋巴细胞表面标?/p>

 

一、实验目?/p>

 

1.

了解流式细胞仪的组成?/p>

原理及应用:

初步了解流式细胞仪的工作元件及基本应用原

理;能够认识流式细胞术的应用,特别是常用的一些功能?/p>

 

2. 

熟悉用流式细胞术检测小鼠脾?/p>

T

细胞表面标志的基本流?/p>

 

3. 

学习并掌握流式细胞术结果的分析:能够基本看懂结果图,重点掌握“门”和“补

偿”两个概念?/p>

 

二、实验原?/p>

 

1.

 

流式细胞?/p>

?/p>

Flow 

Cytometry, 

简?/p>

FCM

?/p>

是一种可以快速?/p>

准确、客观,

并且同时

检测单个微?/p>

(通常是细胞)

的多项特?/p>

(多参数?/p>

的技术,

同时可以对特定群体加以分选?/p>

 

特点:可检测的样本种类多样,大小范围较广(0.2~50µm?/p>

;检测速度快,分析样本?/p>

大(快速、大量)

;细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏;采用激光作为激发光源,

保证其具有更好的单色性与激发效率;

利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术,

?/p>

证检测的灵敏度和特异性;

用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进

行数据处理分析,保证了检测速度

10000

个细?/p>

(

微粒

)/

秒与统计分析精确性?/p>

 

2. 

流式细胞仪组成及原理

 

Fluidics (

液流系统

)

——流体动力学聚焦样本形成单细胞流?/p>

 

鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液?/p>

主要作用是包裹样本流的周围,

保持样本流中

细胞处于喷嘴中心位置?/p>

防止其靠近孔壁而阻塞喷孔?/p>

匀速流动,

保证每个细胞通过激光照

射区的时间相等,从而得到准确的细胞荧光信息?/p>

 

Optics (

光学系统

)

——激发和收集光信号?/p>

 

激发系统包括:激光器、透镜和反射镜,将激光聚焦到检测区

 

收集系统包括:光学镜片和滤光片、光信号检测器

 

流式细胞仪收集的信号?/p>

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1

)散射光信号:细胞在液柱中与激光束相交时向周围

360

°

立体角方向散射的光线信号,它的强弱与细胞的大小、形状?/p>

胞内颗粒折射等有关,主要?/p>

为前向散射光

(

信号强弱与细胞体积大小成正比

)

和侧向散射光

(

检测细胞粒度和细胞内相?/p>

复杂?/p>

)

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FS-SS

图可对未染色的活细胞进行分析或分选,但不能分析表面分子(

2

)荧光信

号:

荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生?/p>

发射的荧光波长与激发光

波长不同?/p>

每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色,

通过波长选择通透性滤片,

可将?/p>

同波长的散射光和荧光信号区分开?/p>

送入不同的光电倍增管;

选择不同的单抗及染料就可?/p>

时测定一个细胞上的多个不同特征?/p>

 

Electronics 

(

电子系统

)

——数据处理系统,扩大信号,将光信号转化为电信号,处理

信号并存储于电脑?/p>

 

3.

流式步骤

 

第一步:

用带有不同荧光基团的抗体分别识别并结合细胞上不同抗原

(染色)

?/p>

第二步:

带有荧光的细胞一个接一个通过激光;

第三步:

不同荧光基团有不同发射光谱,

荧光染料?/p>

择原则:

必须能够被流式细胞仪上所配备的激光器所激发?/p>

激发光谱必须在仪器上滤光片?/p>

够接受的合适范围内?/p>

荧光素光谱的重叠应当尽量减少?/p>

第四步:

复杂的荧光信号被不同?/p>

色镜和滤光片分解;第五步:光电倍增管(

PMT

)将光信号变成电信号;第六步:模数变?/p>

器(

ADC

)进一步将模拟信号变成计算机能处理的数字信?/p>

 

4.

分选基本原?/p>

 

细胞悬液形成液流柱→压电晶体产生机械振动?/p>

流动室振动→液流断裂成液滴→如果?

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流式细胞术检测淋巴细胞表面标?/p>

 

一、实验目?/p>

 

1.

了解流式细胞仪的组成?/p>

原理及应用:

初步了解流式细胞仪的工作元件及基本应用原

理;能够认识流式细胞术的应用,特别是常用的一些功能?/p>

 

2. 

熟悉用流式细胞术检测小鼠脾?/p>

T

细胞表面标志的基本流?/p>

 

3. 

学习并掌握流式细胞术结果的分析:能够基本看懂结果图,重点掌握“门”和“补

偿”两个概念?/p>

 

二、实验原?/p>

 

1.

 

流式细胞?/p>

?/p>

Flow 

Cytometry, 

简?/p>

FCM

?/p>

是一种可以快速?/p>

准确、客观,

并且同时

检测单个微?/p>

(通常是细胞)

的多项特?/p>

(多参数?/p>

的技术,

同时可以对特定群体加以分选?/p>

 

特点:可检测的样本种类多样,大小范围较广(0.2~50µm?/p>

;检测速度快,分析样本?/p>

大(快速、大量)

;细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏;采用激光作为激发光源,

保证其具有更好的单色性与激发效率;

利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术,

?/p>

证检测的灵敏度和特异性;

用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进

行数据处理分析,保证了检测速度

10000

个细?/p>

(

微粒

)/

秒与统计分析精确性?/p>

 

2. 

流式细胞仪组成及原理

 

Fluidics (

液流系统

)

——流体动力学聚焦样本形成单细胞流?/p>

 

鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液?/p>

主要作用是包裹样本流的周围,

保持样本流中

细胞处于喷嘴中心位置?/p>

防止其靠近孔壁而阻塞喷孔?/p>

匀速流动,

保证每个细胞通过激光照

射区的时间相等,从而得到准确的细胞荧光信息?/p>

 

Optics (

光学系统

)

——激发和收集光信号?/p>

 

激发系统包括:激光器、透镜和反射镜,将激光聚焦到检测区

 

收集系统包括:光学镜片和滤光片、光信号检测器

 

流式细胞仪收集的信号?/p>

?/p>

1

)散射光信号:细胞在液柱中与激光束相交时向周围

360

°

立体角方向散射的光线信号,它的强弱与细胞的大小、形状?/p>

胞内颗粒折射等有关,主要?/p>

为前向散射光

(

信号强弱与细胞体积大小成正比

)

和侧向散射光

(

检测细胞粒度和细胞内相?/p>

复杂?/p>

)

?/p>

FS-SS

图可对未染色的活细胞进行分析或分选,但不能分析表面分子(

2

)荧光信

号:

荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生?/p>

发射的荧光波长与激发光

波长不同?/p>

每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色,

通过波长选择通透性滤片,

可将?/p>

同波长的散射光和荧光信号区分开?/p>

送入不同的光电倍增管;

选择不同的单抗及染料就可?/p>

时测定一个细胞上的多个不同特征?/p>

 

Electronics 

(

电子系统

)

——数据处理系统,扩大信号,将光信号转化为电信号,处理

信号并存储于电脑?/p>

 

3.

流式步骤

 

第一步:

用带有不同荧光基团的抗体分别识别并结合细胞上不同抗原

(染色)

?/p>

第二步:

带有荧光的细胞一个接一个通过激光;

第三步:

不同荧光基团有不同发射光谱,

荧光染料?/p>

择原则:

必须能够被流式细胞仪上所配备的激光器所激发?/p>

激发光谱必须在仪器上滤光片?/p>

够接受的合适范围内?/p>

荧光素光谱的重叠应当尽量减少?/p>

第四步:

复杂的荧光信号被不同?/p>

色镜和滤光片分解;第五步:光电倍增管(

PMT

)将光信号变成电信号;第六步:模数变?/p>

器(

ADC

)进一步将模拟信号变成计算机能处理的数字信?/p>

 

4.

分选基本原?/p>

 

细胞悬液形成液流柱→压电晶体产生机械振动?/p>

流动室振动→液流断裂成液滴→如果?

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流式细胞术检测淋巴细胞表面标?/p>

 

一、实验目?/p>

 

1.

了解流式细胞仪的组成?/p>

原理及应用:

初步了解流式细胞仪的工作元件及基本应用原

理;能够认识流式细胞术的应用,特别是常用的一些功能?/p>

 

2. 

熟悉用流式细胞术检测小鼠脾?/p>

T

细胞表面标志的基本流?/p>

 

3. 

学习并掌握流式细胞术结果的分析:能够基本看懂结果图,重点掌握“门”和“补

偿”两个概念?/p>

 

二、实验原?/p>

 

1.

 

流式细胞?/p>

?/p>

Flow 

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简?/p>

FCM

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是一种可以快速?/p>

准确、客观,

并且同时

检测单个微?/p>

(通常是细胞)

的多项特?/p>

(多参数?/p>

的技术,

同时可以对特定群体加以分选?/p>

 

特点:可检测的样本种类多样,大小范围较广(0.2~50µm?/p>

;检测速度快,分析样本?/p>

大(快速、大量)

;细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏;采用激光作为激发光源,

保证其具有更好的单色性与激发效率;

利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术,

?/p>

证检测的灵敏度和特异性;

用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进

行数据处理分析,保证了检测速度

10000

个细?/p>

(

微粒

)/

秒与统计分析精确性?/p>

 

2. 

流式细胞仪组成及原理

 

Fluidics (

液流系统

)

——流体动力学聚焦样本形成单细胞流?/p>

 

鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液?/p>

主要作用是包裹样本流的周围,

保持样本流中

细胞处于喷嘴中心位置?/p>

防止其靠近孔壁而阻塞喷孔?/p>

匀速流动,

保证每个细胞通过激光照

射区的时间相等,从而得到准确的细胞荧光信息?/p>

 

Optics (

光学系统

)

——激发和收集光信号?/p>

 

激发系统包括:激光器、透镜和反射镜,将激光聚焦到检测区

 

收集系统包括:光学镜片和滤光片、光信号检测器

 

流式细胞仪收集的信号?/p>

?/p>

1

)散射光信号:细胞在液柱中与激光束相交时向周围

360

°

立体角方向散射的光线信号,它的强弱与细胞的大小、形状?/p>

胞内颗粒折射等有关,主要?/p>

为前向散射光

(

信号强弱与细胞体积大小成正比

)

和侧向散射光

(

检测细胞粒度和细胞内相?/p>

复杂?/p>

)

?/p>

FS-SS

图可对未染色的活细胞进行分析或分选,但不能分析表面分子(

2

)荧光信

号:

荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生?/p>

发射的荧光波长与激发光

波长不同?/p>

每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色,

通过波长选择通透性滤片,

可将?/p>

同波长的散射光和荧光信号区分开?/p>

送入不同的光电倍增管;

选择不同的单抗及染料就可?/p>

时测定一个细胞上的多个不同特征?/p>

 

Electronics 

(

电子系统

)

——数据处理系统,扩大信号,将光信号转化为电信号,处理

信号并存储于电脑?/p>

 

3.

流式步骤

 

第一步:

用带有不同荧光基团的抗体分别识别并结合细胞上不同抗原

(染色)

?/p>

第二步:

带有荧光的细胞一个接一个通过激光;

第三步:

不同荧光基团有不同发射光谱,

荧光染料?/p>

择原则:

必须能够被流式细胞仪上所配备的激光器所激发?/p>

激发光谱必须在仪器上滤光片?/p>

够接受的合适范围内?/p>

荧光素光谱的重叠应当尽量减少?/p>

第四步:

复杂的荧光信号被不同?/p>

色镜和滤光片分解;第五步:光电倍增管(

PMT

)将光信号变成电信号;第六步:模数变?/p>

器(

ADC

)进一步将模拟信号变成计算机能处理的数字信?/p>

 

4.

分选基本原?/p>

 

细胞悬液形成液流柱→压电晶体产生机械振动?/p>

流动室振动→液流断裂成液滴→如果?



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