Western_blot_璇曞墏閰嶅埗鍙婃搷浣滄祦绋?1) - 鐧惧害鏂囧簱

鏂板缓

涓婁紶

棣栭〉

鍔╂墜

鏈�杩?/div>

璧勬枡搴?/div>

宸ュ叿

Western-Blot

鎿嶄綔娴佺▼

 

 

璇曞墏閰嶅埗

 

铔?/p>

鐧?/p>

鎻?/p>

鍙?/p>

璇?/p>

鍓?/p>

 

1.

 

RIPA

瑁傝В娑?/p>

锛?/p>

 

 

50mM Tris

锛?/p>

MW121.14

锛?/p>

PH7.5

锛?/p>

 

 

 

 

 

 

3.02g 

 

 

 

150mM NaCl 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4.38g 

 

 

1%TritonX-100 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5ml 

 

 

1%

鑴辨哀鑳嗛吀閽?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5g 

 

 

0.1%SDS 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

0.5g 

 

钂搁�忔按鑷�

 

500ml

銆?/p>

 

 

 

 

璋?/p>

pH

鍊艰嚦

7.5

銆?/p>

 

娣峰寑鍚?/p>

4

鈩?/p>

淇濆瓨

锛?/p>

闀挎湡淇濆瓨浜?/p>

-20

鈩?/p>

銆?/p>

浣跨敤鏃?/p>

锛?/p>

鍔犲叆铔嬬櫧閰舵姂鍒跺墏

cooktail

銆?/p>

 

2. 

铔嬬櫧閰舵姂鍒跺墏

cooktail 

 

鎵�闇�姣嶆恫鎴愬垎

锛?/p>

 

 

锛?/p>

1

锛?/p>

100mmol/L PMSF 

 

PMSF 

 

 

 

17.4mg 

 

寮備笝閱?/p>

 

 

1ml 

 

婧惰В鍚?/p>

锛?/p>

鍒嗚�呬�?/p>

1.5ml

绂诲績绠′腑

锛?/p>

-20

鈩?/p>

淇濆瓨

銆?/p>

 

 

锛?/p>

2

锛?/p>

10mM 

浜�鑲界�?/p>

leupeptin: 

 

-20

鈩?/p>

淇濆瓨

 

 

锛?/p>

3

锛?/p>

2.1mg/ml 

鎶戣偨绱?/p>

Aprotinin: 

 

4

鈩?/p>

淇濆瓨

 

 

閰嶅埗

锛?/p>

 

 

 

 

鎴愬垎

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

缁堟祿搴?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

姣?/p>

ml

瑁傝В娑叉墍鍔犳瘝娑查噺

 

 

PMSF 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1mmol/L

锛?/p>

鍌ㄥ瓨娴撳害绋�閲?/p>

100

鍊?/p>

锛?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10ul 

 

Leupeptin 

 

 

 

 

 

 

 

0.1mmol/L

锛?/p>

鍌ㄥ瓨娴撳害绋�閲?/p>

100

鍊?/p>

锛?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10ul 

 

Aprotinin 

 

 

 

 

 

 

 

1ug/ml 

锛?/p>

鍌ㄥ瓨娴撳害绋�閲?/p>

2000

鍊?/p>

锛?/p>

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

0.5ul