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高效液相色谱知识分享
总述
:根据样品在流动相和固定相中的分配系数的不同将组分分离开来,依次通过紫外
检测器检测,再通过色谱工作站输出色谱流出曲线,依据色谱流出曲线我们可以得到:“色
谱峰个数——组分最少个数;保留值——定性分析;面积、峰高——定量分析;保留值、区
域宽度——判断色谱柱的分离效能;两峰间的距离——评价固定相、流动相的选择及配比是
否合适”等信息?/p>
下面从以下几方面进行阐述(原理、设备、注意事项)?/p>
I
.概?/p>
一、液相色谱理论发展简?/p>
1
、色谱法的诞?/p>
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特
?/p>
Tswett
?/p>
?/p>
1906
年研究用碳酸钙分离植物色素时
发现的,色谱?/p>
(Chromatography)
因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法?/p>
气相色谱法、液相色谱法?/p>
2
?/p>
HPLC
的特点和优点
2.1 HPLC
有以下特点:
高压
-
压力可达
150~300Kg/cm2
。色谱柱每米降压?/p>
75 Kg/cm2
以上?/p>
高?/p>
-
流速为
0.1~10.0 ml/min
?/p>
高效
-
可达
5000
塔板每米。在一根柱中同时分离成份可?/p>
100
种?/p>
高灵敏度
-
紫外检测器灵敏度可?/p>
0.01ng
。同时消耗样品少?/p>
2.2
HPLC
与经典液相色谱相比有以下
优点
?/p>
速度?/p>
-
通常分析一个样品在
15~30 min
,有些样品甚至在
5 min
内即可完成?/p>
分辨率高
-
可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果?/p>
灵敏度高
-
紫外检测器可达
0.01ng
,荧光和电化学检测器可达
0.1pg
?/p>
柱子可反复使?/p>
-
用一根色谱柱可分离不同的化合物?/p>
样品量少,容易回?/p>
-
样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备?/p>
色谱法的
分离原理
是:溶于流动?/p>
(mobile phase)
中的各组分经过固定相时,由于与固定相
(stationary phase)
发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,
在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法?/p>
二、基本概念和术语
1
.色谱图和峰参数