实验
22
过氧化物酶活性的测定
过氧化物牌是植物体内普遍存在的?/p>
活性较高的一种酶?/p>
它与呼吸作用?/p>
光合作用及生
长素的氧化等都有密切关系?/p>
在植物生长发育过程中?/p>
它的活性不断发生变化,
因此测量?/p>
种酶?/p>
可以反映某一时期植物体内代谢的变化?/p>
通过本实验了解过氧化物酶的作用,
掌握?/p>
用的测定过氧化物酶的方法一愈创木酚法?/p>
一、原?/p>
在过氧化物酶
(peroxidase)
催化?/p>
,H2O2
将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物?/p>
470m
处有
最大光吸收,故可通过?/p>
470 nm
下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性?/p>
二、材料、仪器设备及试剂
(
一
)
材料
马铃薯块茎?/p>
(
?/p>
)
仪器设备
722
型分光光度计,离心机,研钵,容量瓶,量筒,试管,吸管?/p>
(
?/p>
)
试剂
(1)0.05 mol/L.pH5.
的磷酸缓冲液?/p>
(2)0.05 mo/L
愈创木份溶液?/p>
(3) 2%H
2
0
2
?/p>
(4)20%
三氯乙酸?/p>
三、实验步?/p>
(
一
)
酶液的制?/p>
?/p>
5.0g
洗净去皮的马铃薯块茎,切碎放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆?/p>
将匀浆液全部转人离心管中
,
?/p>
3000g
离心
10 min,
上清被转?/p>
25 mL,
容量瓶中?/p>
沉淀?/p>
5 mL
磷酸缓冲液再提取两次,上清液并人容量瓶中,定容至刻度,低温下保存备用?/p>
(
?/p>
)
过氧化物酶活性测?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
:2.9
mL.0.05
mol/L
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
;
1.0ml.2%H
2
O
2
?/p>
1.0mL.0.05mol/L
愈创木面?/p>
0.1mL
酶液。用加热煮沸
5min
的酶成为对照,反应体系加人酶
液后,立即于
37C
水浴中保?/p>
15min.
然后迅速转人冰浴中,并加人
2.0ml.20%
三氯乙酸终止
反应,然后,过虑
(
?/p>
5000xg
离心
10min),
适当稀?/p>
.470mm
波长下测定吸光度?/p>
四、结果计?/p>
以每分钟?/p>
A
470
变化
0.01
?/p>
1
个过氧化物酶活性单?/p>
(u)
?/p>