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实验

22

过氧化物酶活性的测定

 

 

过氧化物牌是植物体内普遍存在的?/p>

活性较高的一种酶?/p>

它与呼吸作用?/p>

光合作用及生

长素的氧化等都有密切关系?/p>

在植物生长发育过程中?/p>

它的活性不断发生变化,

因此测量?/p>

种酶?/p>

可以反映某一时期植物体内代谢的变化?/p>

通过本实验了解过氧化物酶的作用,

掌握?/p>

用的测定过氧化物酶的方法一愈创木酚法?/p>

 

一、原?/p>

 

在过氧化物酶

(peroxidase)

催化?/p>

,H2O2

将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物?/p>

470m

处有

最大光吸收,故可通过?/p>

470 nm

下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性?/p>

 

二、材料、仪器设备及试剂

 

(

一

)

材料

 

马铃薯块茎?/p>

 

(

?/p>

)

仪器设备

 

722

型分光光度计,离心机,研钵,容量瓶,量筒,试管,吸管?/p>

 

(

?/p>

)

试剂

 

(1)0.05 mol/L.pH5.

的磷酸缓冲液?/p>

 

 

 

(2)0.05 mo/L

愈创木份溶液?/p>

 

(3) 2%H

2

0

2

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(4)20%

三氯乙酸?/p>

 

三、实验步?/p>

 

(

一

)

酶液的制?/p>

 

?/p>

5.0g

洗净去皮的马铃薯块茎,切碎放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆?/p>

将匀浆液全部转人离心管中

,

?/p>

3000g

离心

10 min,

上清被转?/p>

25 mL,

容量瓶中?/p>

沉淀?/p>

5 mL

磷酸缓冲液再提取两次,上清液并人容量瓶中,定容至刻度,低温下保存备用?/p>

 

(

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)

过氧化物酶活性测?/p>

 

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1.0ml.2%H

2

O

2 

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1.0mL.0.05mol/L

愈创木面?/p>

0.1mL

酶液。用加热煮沸

5min

的酶成为对照,反应体系加人酶

液后,立即于

37C

水浴中保?/p>

15min.

然后迅速转人冰浴中,并加人

2.0ml.20%

三氯乙酸终止

反应,然后,过虑

(

?/p>

5000xg

离心

10min),

适当稀?/p>

.470mm

波长下测定吸光度?/p>

 

四、结果计?/p>

 

以每分钟?/p>

A

470

变化

0.01

?/p>

1

个过氧化物酶活性单?/p>

(u)

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实验

22

过氧化物酶活性的测定

 

 

过氧化物牌是植物体内普遍存在的?/p>

活性较高的一种酶?/p>

它与呼吸作用?/p>

光合作用及生

长素的氧化等都有密切关系?/p>

在植物生长发育过程中?/p>

它的活性不断发生变化,

因此测量?/p>

种酶?/p>

可以反映某一时期植物体内代谢的变化?/p>

通过本实验了解过氧化物酶的作用,

掌握?/p>

用的测定过氧化物酶的方法一愈创木酚法?/p>

 

一、原?/p>

 

在过氧化物酶

(peroxidase)

催化?/p>

,H2O2

将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物?/p>

470m

处有

最大光吸收,故可通过?/p>

470 nm

下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性?/p>

 

二、材料、仪器设备及试剂

 

(

一

)

材料

 

马铃薯块茎?/p>

 

(

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)

仪器设备

 

722

型分光光度计,离心机,研钵,容量瓶,量筒,试管,吸管?/p>

 

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试剂

 

(1)0.05 mol/L.pH5.

的磷酸缓冲液?/p>

 

 

 

(2)0.05 mo/L

愈创木份溶液?/p>

 

(3) 2%H

2

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(4)20%

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三、实验步?/p>

 

(

一

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酶液的制?/p>

 

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5.0g

洗净去皮的马铃薯块茎,切碎放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆?/p>

将匀浆液全部转人离心管中

,

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3000g

离心

10 min,

上清被转?/p>

25 mL,

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5 mL

磷酸缓冲液再提取两次,上清液并人容量瓶中,定容至刻度,低温下保存备用?/p>

 

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酶液。用加热煮沸

5min

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液后,立即于

37C

水浴中保?/p>

15min.

然后迅速转人冰浴中,并加人

2.0ml.20%

三氯乙酸终止

反应,然后,过虑

(

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离心

10min),

适当稀?/p>

.470mm

波长下测定吸光度?/p>

 

四、结果计?/p>

 

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实验

22

过氧化物酶活性的测定

 

 

过氧化物牌是植物体内普遍存在的?/p>

活性较高的一种酶?/p>

它与呼吸作用?/p>

光合作用及生

长素的氧化等都有密切关系?/p>

在植物生长发育过程中?/p>

它的活性不断发生变化,

因此测量?/p>

种酶?/p>

可以反映某一时期植物体内代谢的变化?/p>

通过本实验了解过氧化物酶的作用,

掌握?/p>

用的测定过氧化物酶的方法一愈创木酚法?/p>

 

一、原?/p>

 

在过氧化物酶

(peroxidase)

催化?/p>

,H2O2

将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物?/p>

470m

处有

最大光吸收,故可通过?/p>

470 nm

下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性?/p>

 

二、材料、仪器设备及试剂

 

(

一

)

材料

 

马铃薯块茎?/p>

 

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仪器设备

 

722

型分光光度计,离心机,研钵,容量瓶,量筒,试管,吸管?/p>

 

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试剂

 

(1)0.05 mol/L.pH5.

的磷酸缓冲液?/p>

 

 

 

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(3) 2%H

2

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三、实验步?/p>

 

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洗净去皮的马铃薯块茎,切碎放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆?/p>

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离心

10 min,

上清被转?/p>

25 mL,

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5 mL

磷酸缓冲液再提取两次,上清液并人容量瓶中,定容至刻度,低温下保存备用?/p>

 

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5min

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37C

水浴中保?/p>

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然后迅速转人冰浴中,并加人

2.0ml.20%

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10min),

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植物生理指标测定 - 百度文库
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22

过氧化物酶活性的测定

 

 

过氧化物牌是植物体内普遍存在的?/p>

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它与呼吸作用?/p>

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长素的氧化等都有密切关系?/p>

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一、原?/p>

 

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催化?/p>

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最大光吸收,故可通过?/p>

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二、材料、仪器设备及试剂

 

(

一

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材料

 

马铃薯块茎?/p>

 

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仪器设备

 

722

型分光光度计,离心机,研钵,容量瓶,量筒,试管,吸管?/p>

 

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试剂

 

(1)0.05 mol/L.pH5.

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(2)0.05 mo/L

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(3) 2%H

2

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三、实验步?/p>

 

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酶液的制?/p>

 

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5.0g

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10 min,

上清被转?/p>

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酶液。用加热煮沸

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水浴中保?/p>

15min.

然后迅速转人冰浴中,并加人

2.0ml.20%

三氯乙酸终止

反应,然后,过虑

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5000xg

离心

10min),

适当稀?/p>

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波长下测定吸光度?/p>

 

四、结果计?/p>

 

以每分钟?/p>

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