滤膜?/p>
-
粪大肠菌群的测定
1
?/p>
适用范围
本标准适用于地表水?/p>
地下水?/p>
及水中粪大肠菌群的测定?/p>
用于检验加氯消
毒的水样时,
在滤膜法之前?/p>
先做试验?/p>
证实它所得的数据资料与多管发酵试?/p>
所得的数据资料具有可比性?/p>
2
?/p>
原理
滤膜是一种微孔性薄膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜(孔?/p>
0.45
微米?/p>
的滤器中,经过抽滤,细菌即被截留在膜上,然后将滤膜贴?/p>
M-FC
培养基上?/p>
44.5
℃温度下进行培养,计数滤膜上生长的此特性的菌落数,计算出每
1L
水样
中含有粪大肠菌群数?/p>
3
仪器?/p>
滤膜(孔?/p>
0.45
微米?/p>
、滤器、接液瓶、垫圈、无菌镊子夹
3
、培养基和试?/p>
本标准所用试剂除另有注明外,
均为符合国家标准的分析纯化学试剂?/p>
实验
室用水为新制备的去离子水?/p>
M-FC
培养基:
胰胨
10g
蛋白?/p>
5g
酵母浸膏
3.0g
氯化?/p>
5.0g
乳糖
12.5g
胆盐三号
1.5g
1%
苯胺蓝水?/p>
10ml
1%
玫瑰色酸溶液(溶?/p>
0.2mol/L
氢氧化钠液中?/p>
10ml
蒸馏?/p>
1000ml
制法?/p>
将上述培养基中的成分(除苯胺蓝和玫瑰色酸外)
,置于蒸馏水中加热溶
解,调节
PH
?/p>
7.4
,分装于小烧瓶内,每?/p>
100ml
,于
115
℃灭?/p>
20min
。储?/p>
于冰箱中备用,临用前,按上述配比,用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的
1%
?/p>
胺蓝溶液
1ml
及新配制?/p>
1%
玫瑰色酸溶液
(溶于氢氧化钠溶液)
1ml
?/p>
混合均匀?/p>
加热溶解前,加入
1.2%
?/p>
1.5%
琼脂制成固体培养基。如培养物中杂菌不多,则
培养基中不加玫瑰色酸亦可?/p>
4
?/p>
步骤
水样的选择?/p>
水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密?/p>
而定。理想的水样体积是一片滤膜上生长
20
?/p>
60
个粪大肠群菌落,总菌落数?/p>
超过
200
个?/p>
滤膜及滤膜灭菌:将滤膜放入高压蒸汽灭菌锅里在
121
℃灭?/p>
10min
,滤器、接
液瓶、垫圈分别用纸包好,在使用前?/p>
121
℃灭?/p>
20min
,滤器也可用点燃的酒
精棉球火焰灭菌?/p>
过滤
:用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘,将粗糙面向上,贴放在已灭菌的滤床上?/p>
稳妥的固定好滤器?/p>
将适量的水样注入滤器中?/p>
加盖?/p>
开动真空泵即可抽滤除菌?/p>