实验?/p>
叶绿体色素的提取分离与理化性质鉴定
一、实验目?/p>
1
、学会叶绿体色素提取和分离的方法?/p>
2
、了解叶绿体色素的荧光现象、皂化反应等理化性质?/p>
二、实验原?/p>
叶绿体中含有绿色素(包括叶绿?/p>
a
和叶绿素
b
)和黄色素(包括胡萝卜素和叶黄素?/p>
两大类,这两类色素都不溶于水,而溶于有机溶剂,故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取?/p>
提取液可用色层分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同,当用适当
的溶剂推动时?/p>
混合物中各成分在两相(流动相和固定相)间具有不同的分配系数,所以它
们的移动速度不同,经过一定时间层析后,便将混合色素分离?/p>
叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯,故可与碱起皂化反?/p>
而生成醇(甲醇和叶绿醇)和叶绿酸的盐,产生的盐能溶于水中?/p>
可用此法将叶绿素与类?/p>
萝卜素分开?/p>
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性,
叶绿素吸收光量子而转变成激发态,
激
发态的叶绿素分子很不稳定,
当它变回到基态时可发射出红光量子?/p>
因而产生荧光?/p>
叶绿?/p>
中的镁可以被
H
+
所取代而成褐色的去镁叶绿素?/p>
后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素?/p>
铜代?/p>
绿素很稳定,在光下不易破坏,故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本?/p>
三、实验器?/p>
新鲜的植物叶片?/p>
研钵?/p>
漏斗?/p>
100ml
三角瓶;
玻璃棒;
剪刀?/p>
滴管?/p>
培养皿;
定性滤纸条
?cm×1.5cm?/p>
?/p>
毛细管;试管;试管架;石棉网;烧杯(
100ml
?/p>
;酒精灯;铁三角架;刻度吸量?/p>
2ml
?/p>
5ml
?/p>
1
支?/p>
四、实验试?/p>
1
?/p>
95%
乙醇;石英砂;碳酸钙?/p>
2
、推动剂:按石油醚:丙酮:苯?/p>
10
?/p>
2
?/p>
1
)比例配制(体积比)
3
、醋酸铜粉末?/p>
5%
的稀盐酸
4
、甲醇?/p>
KOH
五、实验步?/p>
1
、叶绿体色素的提?/p>
?/p>
1
)取菠菜或其他植物新鲜叶?/p>
4~5
片(
2g
左右?/p>
,洗净,擦干,去掉中脉,剪碎,
放入研钵中?/p>
?/p>
2
?/p>
研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉,
?/p>
2~3ml
95%
乙醇?/p>
研磨至糊状,
再加
10ml
95%