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聚合酶链反应?/p>

polymerase chain reaction

?/p>

PCR

)的基本原理

 

PCR

反应过程与细胞内?/p>

DNA

复制相似?/p>

?/p>

PCR

的反应体系要简?/p>

的多,主要包?/p>

DNA

靶序列、引物?/p>

4

种单核苷?/p>

dNTP

、耐热

DNA

?/p>

合酶以及合适的缓冲液体系?/p>

PCR

反应过程有以?/p>

3

个步骤:①变性。将

反应体系混合物加热到

94 

℃,维持较短时间(大?/p>

15 s-30 s

),使目?/p>

DNA

双螺旋的氢键断裂,形成单?/p>

DNA

作为反应模板?/p>

 

②退火。将?/p>

应体系冷却至特定的温度(引物?/p>

TM

值左右或以下),引物?/p>

DNA

?/p>

板的互补区结合,形成模板引物复合物?/p>

 

③延伸?/p>

将反应体系的温度提高

?/p>

72 

℃并维持一段时间,引物在耐热聚合酶的作用下,以引物为固定?/p>

点,?/p>

4

种单核苷酸(

dNTP

)作为底物合成新?/p>

DNA

链。以上三步作?/p>

一个循环重复的进行,每一循环的产物作为下一循环的模板。如此循环数

十次,从而使目的基因得到指数级扩增,达到检测或获取基因的目的?/p>

 

2 PCR

仪的分类

 

 

 

根据

DNA

扩增的目的和检测的标准可以?/p>

PCR

仪分?/p>

普?/p>

PCR

仪,

梯度

PCR

仪,原位

PCR

,实时荧光定?/p>

PCR

?/p>

等几类?/p>

 

 

2.1

普?/p>

PCR

?/p>

 

一般把一?/p>

PCR

扩增只能运行一个特定退火温度的

PCR

仪,称之?/p>

普?/p>

PCR

仪?/p>

如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行?/p>

主要是用?/p>

简单的,对目的基因退火温度的扩增?/p>

 

主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等?/p>

 

2.2 

梯度

PCR

?/p>

 

一次?/p>

PCR

扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常

12

种温

度梯度)的称之为梯度

PCR

仪。因为被扩增的不同的

DNA

片段其最适合

的退火温度不同,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次?/p>

PCR

扩增就可以筛选出表达量高的最适合退火温度进行有效的扩增。主?/p>

用于研究未知

DNA

退火温度的扩增,这样既节约时间,也节约经费。在

不设置梯度的情况下亦可当做普通的

PCR

用?/p>

真正的梯度,

是每一排管?/p>

有精确的加热控温探头?/p>

2009

年为止只?/p>

美国

ABI

公司

可以做到。其?/p>

的都是从两头的热传递来设计控温?/p>

 

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聚合酶链反应?/p>

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PCR

)的基本原理

 

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反应过程与细胞内?/p>

DNA

复制相似?/p>

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PCR

的反应体系要简?/p>

的多,主要包?/p>

DNA

靶序列、引物?/p>

4

种单核苷?/p>

dNTP

、耐热

DNA

?/p>

合酶以及合适的缓冲液体系?/p>

PCR

反应过程有以?/p>

3

个步骤:①变性。将

反应体系混合物加热到

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℃,维持较短时间(大?/p>

15 s-30 s

),使目?/p>

DNA

双螺旋的氢键断裂,形成单?/p>

DNA

作为反应模板?/p>

 

②退火。将?/p>

应体系冷却至特定的温度(引物?/p>

TM

值左右或以下),引物?/p>

DNA

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板的互补区结合,形成模板引物复合物?/p>

 

③延伸?/p>

将反应体系的温度提高

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72 

℃并维持一段时间,引物在耐热聚合酶的作用下,以引物为固定?/p>

点,?/p>

4

种单核苷酸(

dNTP

)作为底物合成新?/p>

DNA

链。以上三步作?/p>

一个循环重复的进行,每一循环的产物作为下一循环的模板。如此循环数

十次,从而使目的基因得到指数级扩增,达到检测或获取基因的目的?/p>

 

2 PCR

仪的分类

 

 

 

根据

DNA

扩增的目的和检测的标准可以?/p>

PCR

仪分?/p>

普?/p>

PCR

仪,

梯度

PCR

仪,原位

PCR

,实时荧光定?/p>

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等几类?/p>

 

 

2.1

普?/p>

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一般把一?/p>

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扩增只能运行一个特定退火温度的

PCR

仪,称之?/p>

普?/p>

PCR

仪?/p>

如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行?/p>

主要是用?/p>

简单的,对目的基因退火温度的扩增?/p>

 

主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等?/p>

 

2.2 

梯度

PCR

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一次?/p>

PCR

扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常

12

种温

度梯度)的称之为梯度

PCR

仪。因为被扩增的不同的

DNA

片段其最适合

的退火温度不同,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次?/p>

PCR

扩增就可以筛选出表达量高的最适合退火温度进行有效的扩增。主?/p>

用于研究未知

DNA

退火温度的扩增,这样既节约时间,也节约经费。在

不设置梯度的情况下亦可当做普通的

PCR

用?/p>

真正的梯度,

是每一排管?/p>

有精确的加热控温探头?/p>

2009

年为止只?/p>

美国

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可以做到。其?/p>

的都是从两头的热传递来设计控温?/p>

 

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反应过程与细胞内?/p>

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复制相似?/p>

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PCR

的反应体系要简?/p>

的多,主要包?/p>

DNA

靶序列、引物?/p>

4

种单核苷?/p>

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、耐热

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合酶以及合适的缓冲液体系?/p>

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反应过程有以?/p>

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反应体系混合物加热到

94 

℃,维持较短时间(大?/p>

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双螺旋的氢键断裂,形成单?/p>

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作为反应模板?/p>

 

②退火。将?/p>

应体系冷却至特定的温度(引物?/p>

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值左右或以下),引物?/p>

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板的互补区结合,形成模板引物复合物?/p>

 

③延伸?/p>

将反应体系的温度提高

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72 

℃并维持一段时间,引物在耐热聚合酶的作用下,以引物为固定?/p>

点,?/p>

4

种单核苷酸(

dNTP

)作为底物合成新?/p>

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链。以上三步作?/p>

一个循环重复的进行,每一循环的产物作为下一循环的模板。如此循环数

十次,从而使目的基因得到指数级扩增,达到检测或获取基因的目的?/p>

 

2 PCR

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根据

DNA

扩增的目的和检测的标准可以?/p>

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普?/p>

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等几类?/p>

 

 

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一般把一?/p>

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扩增只能运行一个特定退火温度的

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普?/p>

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如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行?/p>

主要是用?/p>

简单的,对目的基因退火温度的扩增?/p>

 

主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等?/p>

 

2.2 

梯度

PCR

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一次?/p>

PCR

扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常

12

种温

度梯度)的称之为梯度

PCR

仪。因为被扩增的不同的

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片段其最适合

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扩增就可以筛选出表达量高的最适合退火温度进行有效的扩增。主?/p>

用于研究未知

DNA

退火温度的扩增,这样既节约时间,也节约经费。在

不设置梯度的情况下亦可当做普通的

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用?/p>

真正的梯度,

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PCR仪的分类 - 百度文库
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聚合酶链反应?/p>

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)的基本原理

 

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反应过程与细胞内?/p>

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复制相似?/p>

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的反应体系要简?/p>

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靶序列、引物?/p>

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种单核苷?/p>

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、耐热

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合酶以及合适的缓冲液体系?/p>

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反应过程有以?/p>

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个步骤:①变性。将

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℃,维持较短时间(大?/p>

15 s-30 s

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②退火。将?/p>

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③延伸?/p>

将反应体系的温度提高

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72 

℃并维持一段时间,引物在耐热聚合酶的作用下,以引物为固定?/p>

点,?/p>

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)作为底物合成新?/p>

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2 PCR

仪的分类

 

 

 

根据

DNA

扩增的目的和检测的标准可以?/p>

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仪分?/p>

普?/p>

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梯度

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仪,原位

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,实时荧光定?/p>

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等几类?/p>

 

 

2.1

普?/p>

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?/p>

 

一般把一?/p>

PCR

扩增只能运行一个特定退火温度的

PCR

仪,称之?/p>

普?/p>

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仪?/p>

如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行?/p>

主要是用?/p>

简单的,对目的基因退火温度的扩增?/p>

 

主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等?/p>

 

2.2 

梯度

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一次?/p>

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扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常

12

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度梯度)的称之为梯度

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仪。因为被扩增的不同的

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片段其最适合

的退火温度不同,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次?/p>

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扩增就可以筛选出表达量高的最适合退火温度进行有效的扩增。主?/p>

用于研究未知

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退火温度的扩增,这样既节约时间,也节约经费。在

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