品保部实验操作指导书
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
3
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
?/p>
主题
分析室样品检测指导书
编号
DNA
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染
1
?/p>
目的:规?/p>
银染检测非变性聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质或
DNA
的测定方法与操作,特?/p>
定本规程?/p>
2
.范围:本规程适用于已知蛋白表达的测定?/p>
3
.责任:实验室检验人员对实施本规程负责?/p>
4
.实验原理:
在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以?/p>
银颗粒沉积在蛋白带上?/p>
染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关?/p>
不含或者很少含半胱
氨酸残基的蛋白质有时候呈负染?/p>
5
.仪器与器具
移液枪和枪头、脱色摇床?/p>
EP
管?/p>
205ml
锥形瓶、塑料盒、电泳仪、垂直电泳槽及其?/p>
件、玻璃板
6
.电泳试?/p>
6.1
?/p>
30%
丙烯酰胺溶液?/p>
丙烯酰胺?/p>
29g,N,N
?/p>
-
亚甲基双丙烯酰胺?/p>
1g,
加去离子水定容至
100ml
,装于棕
色瓶内,
4
℃可保存两个月?/p>
6.2
.过硫酸?/p>
0.1g/ml
:称取过硫酸?/p>
1g
加去离子水?/p>
10ml
?/p>
4
℃可保存一周,
-20
℃可?/p>
存一个月?/p>
6.3
?/p>
TEMED(
四甲基乙烯基二胺
)
:和
过硫酸铵一起作为交联反应的催化剂。易吸潮?/p>
4
℃封
闭保存?/p>
6.4. 5*TBE
电泳缓冲?/p>
分别称取
54
?/p>
Tris,27.5
克硼酸,
20ml0.5M/EDTA(pH=8.0)
定容?/p>
1L
6.5.
上样
Loading Buffer
分别准确称量溴酚蓝和二甲苯青?/p>
0.1
克,转入
50ml
容量瓶中(黏附在称量纸上的少?/p>
粉末可用移液器西区甲酰胺钟乳容量瓶中?/p>
,再介入
1mlEDTA
,最后用甲酰胺定容至
50ml
?/p>
7.
银染试剂