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品保部实验操作指导书

 

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主题

 

分析室样品检测指导书

 

编号

 

  

DNA

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染

 

1

?/p>

 

目的:规?/p>

银染检测非变性聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质或

DNA

的测定方法与操作,特?/p>

定本规程?/p>

 

2

.范围:本规程适用于已知蛋白表达的测定?/p>

 

3

.责任:实验室检验人员对实施本规程负责?/p>

 

4

.实验原理:

 

在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以?/p>

银颗粒沉积在蛋白带上?/p>

染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关?/p>

不含或者很少含半胱

氨酸残基的蛋白质有时候呈负染?/p>

 

  

5

.仪器与器具

 

   

移液枪和枪头、脱色摇床?/p>

EP

管?/p>

 205ml

锥形瓶、塑料盒、电泳仪、垂直电泳槽及其?/p>

件、玻璃板

 

6

.电泳试?/p>

 

6.1

?/p>

30%

丙烯酰胺溶液?/p>

  

丙烯酰胺?/p>

29g,N,N

?/p>

-

亚甲基双丙烯酰胺?/p>

1g,

加去离子水定容至

100ml

,装于棕

色瓶内,

4

℃可保存两个月?/p>

 

6.2

.过硫酸?/p>

0.1g/ml

:称取过硫酸?/p>

1g

加去离子水?/p>

10ml

?/p>

4

℃可保存一周,

-20

℃可?/p>

存一个月?/p>

   

6.3

?/p>

TEMED(

四甲基乙烯基二胺

)

:和

 

过硫酸铵一起作为交联反应的催化剂。易吸潮?/p>

4

℃封

闭保存?/p>

 

6.4. 5*TBE

电泳缓冲?/p>

 

   

分别称取

54

?/p>

Tris,27.5

克硼酸,

20ml0.5M/EDTA(pH=8.0)

定容?/p>

1L 

6.5.

上样

Loading Buffer 

  

分别准确称量溴酚蓝和二甲苯青?/p>

0.1

克,转入

50ml

容量瓶中(黏附在称量纸上的少?/p>

粉末可用移液器西区甲酰胺钟乳容量瓶中?/p>

,再介入

1mlEDTA

,最后用甲酰胺定容至

50ml

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7.

银染试剂

 

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主题

 

分析室样品检测指导书

 

编号

 

  

DNA

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染

 

1

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目的:规?/p>

银染检测非变性聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质或

DNA

的测定方法与操作,特?/p>

定本规程?/p>

 

2

.范围:本规程适用于已知蛋白表达的测定?/p>

 

3

.责任:实验室检验人员对实施本规程负责?/p>

 

4

.实验原理:

 

在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以?/p>

银颗粒沉积在蛋白带上?/p>

染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关?/p>

不含或者很少含半胱

氨酸残基的蛋白质有时候呈负染?/p>

 

  

5

.仪器与器具

 

   

移液枪和枪头、脱色摇床?/p>

EP

管?/p>

 205ml

锥形瓶、塑料盒、电泳仪、垂直电泳槽及其?/p>

件、玻璃板

 

6

.电泳试?/p>

 

6.1

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30%

丙烯酰胺溶液?/p>

  

丙烯酰胺?/p>

29g,N,N

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-

亚甲基双丙烯酰胺?/p>

1g,

加去离子水定容至

100ml

,装于棕

色瓶内,

4

℃可保存两个月?/p>

 

6.2

.过硫酸?/p>

0.1g/ml

:称取过硫酸?/p>

1g

加去离子水?/p>

10ml

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4

℃可保存一周,

-20

℃可?/p>

存一个月?/p>

   

6.3

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TEMED(

四甲基乙烯基二胺

)

:和

 

过硫酸铵一起作为交联反应的催化剂。易吸潮?/p>

4

℃封

闭保存?/p>

 

6.4. 5*TBE

电泳缓冲?/p>

 

   

分别称取

54

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Tris,27.5

克硼酸,

20ml0.5M/EDTA(pH=8.0)

定容?/p>

1L 

6.5.

上样

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分别准确称量溴酚蓝和二甲苯青?/p>

0.1

克,转入

50ml

容量瓶中(黏附在称量纸上的少?/p>

粉末可用移液器西区甲酰胺钟乳容量瓶中?/p>

,再介入

1mlEDTA

,最后用甲酰胺定容至

50ml

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7.

银染试剂

 

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主题

 

分析室样品检测指导书

 

编号

 

  

DNA

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染

 

1

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目的:规?/p>

银染检测非变性聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质或

DNA

的测定方法与操作,特?/p>

定本规程?/p>

 

2

.范围:本规程适用于已知蛋白表达的测定?/p>

 

3

.责任:实验室检验人员对实施本规程负责?/p>

 

4

.实验原理:

 

在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以?/p>

银颗粒沉积在蛋白带上?/p>

染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关?/p>

不含或者很少含半胱

氨酸残基的蛋白质有时候呈负染?/p>

 

  

5

.仪器与器具

 

   

移液枪和枪头、脱色摇床?/p>

EP

管?/p>

 205ml

锥形瓶、塑料盒、电泳仪、垂直电泳槽及其?/p>

件、玻璃板

 

6

.电泳试?/p>

 

6.1

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30%

丙烯酰胺溶液?/p>

  

丙烯酰胺?/p>

29g,N,N

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-

亚甲基双丙烯酰胺?/p>

1g,

加去离子水定容至

100ml

,装于棕

色瓶内,

4

℃可保存两个月?/p>

 

6.2

.过硫酸?/p>

0.1g/ml

:称取过硫酸?/p>

1g

加去离子水?/p>

10ml

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4

℃可保存一周,

-20

℃可?/p>

存一个月?/p>

   

6.3

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TEMED(

四甲基乙烯基二胺

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:和

 

过硫酸铵一起作为交联反应的催化剂。易吸潮?/p>

4

℃封

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6.4. 5*TBE

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分别称取

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克硼酸,

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上样

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分别准确称量溴酚蓝和二甲苯青?/p>

0.1

克,转入

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容量瓶中(黏附在称量纸上的少?/p>

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银染试剂

 

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非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染实验操作指导?银染) V1.0 - 百度文库
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主题

 

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编号

 

  

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非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染

 

1

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目的:规?/p>

银染检测非变性聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质或

DNA

的测定方法与操作,特?/p>

定本规程?/p>

 

2

.范围:本规程适用于已知蛋白表达的测定?/p>

 

3

.责任:实验室检验人员对实施本规程负责?/p>

 

4

.实验原理:

 

在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以?/p>

银颗粒沉积在蛋白带上?/p>

染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关?/p>

不含或者很少含半胱

氨酸残基的蛋白质有时候呈负染?/p>

 

  

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.仪器与器具

 

   

移液枪和枪头、脱色摇床?/p>

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 205ml

锥形瓶、塑料盒、电泳仪、垂直电泳槽及其?/p>

件、玻璃板

 

6

.电泳试?/p>

 

6.1

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30%

丙烯酰胺溶液?/p>

  

丙烯酰胺?/p>

29g,N,N

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-

亚甲基双丙烯酰胺?/p>

1g,

加去离子水定容至

100ml

,装于棕

色瓶内,

4

℃可保存两个月?/p>

 

6.2

.过硫酸?/p>

0.1g/ml

:称取过硫酸?/p>

1g

加去离子水?/p>

10ml

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4

℃可保存一周,

-20

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四甲基乙烯基二胺

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过硫酸铵一起作为交联反应的催化剂。易吸潮?/p>

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分别称取

54

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分别准确称量溴酚蓝和二甲苯青?/p>

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