ELISA
(酶联免疫吸附测定,
enzyme linked immunosorbent assay
)指将可?/p>
性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上?/p>
利用抗原抗体结合专一性进行免
疫反应的定性和定量检测方法?/p>
基本原理
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使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性?/p>
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使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体?/p>
这种酶标抗原或抗体既?/p>
留其免疫活性,又保留酶的活性?/p>
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在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不
同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应?/p>
用洗涤的方法使固相载体上形成
的抗原抗体复合物与其他物质分开?/p>
最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检
物质的量成一定的比例?/p>
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加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受
检物质的量直接相关?/p>
故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析?/p>
由于酶的
催化效率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度?/p>
双抗夹心?/p>
夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤?/p>
:
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将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体?/p>
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加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进
行专一性键结;
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洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗体,与待测抗原进?/p>
键结?/p>
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洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一次抗体键结;
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洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈
色结果?/p>
间接?/p>
间接法常用于检测抗体,一般的操作步骤为:
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将已知的抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余的抗原?/p>
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加入待测检体,检体中若含有待测的一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的?/p>
原进行专一性键结?/p>
?/p>
洗去多余待测检体,加入带有酶的二次抗体,与待测的一次抗体键结?/p>
?/p>
洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酶呈色,藉仪器(
ELISA reader
?/p>
测定塑胶盘中的吸光值(
OD
值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体
的含量?/p>