一、基本原?/p>
高效液相色谱
?/p>
HPLC
?/p>
法是以高压下的液体为流动相,
并采用颗粒极细的高效?/p>
定相的柱色谱分离技术?/p>
高效液相色谱对样品的适用性广?/p>
不受分析对象挥发?/p>
和热稳定性的限制?/p>
因而弥补了气相色谱法的不足?/p>
在目前已知的有机化合物中?/p>
可用气相色谱分析的约?/p>
20%
,?/p>
80%
则需用高效液相色谱来分析?/p>
高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同?/p>
它们之间的重大差别在
于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别?/p>
二、高效液相色谱分析原?/p>
?/p>
1
)、高效液相色谱分析的流程:由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统,然后
输出,经流量与压力测量之后,导入进样器。被测物由进样器注入,并随流动相
通过色谱柱,
在柱上进行分离后进入检测器?/p>
检测信号由数据处理设备采集与处
理,
并记录色谱图?/p>
废液流入废液瓶?/p>
遇到复杂的混合物分离
(极性范围比较宽?/p>
还可用梯度控制器作梯度洗脱?/p>
这和气相色谱的程序升温类似,
不同的是气相?/p>
谱改变温度,?/p>
HPLC
改变的是流动相极性,使样品各组分在最佳条件下得以?/p>
离?/p>
?/p>
2
)、高效液相色谱的分离过程:同其他色谱过程一样,
HPLC
也是溶质在固?/p>
相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程?/p>
它借溶质在两相间分配系数?/p>
?/p>
和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以?/p>
离?/p>
开始样品加在柱头上,假设样品中含有
3
个组分,
A
?/p>
B
?/p>
C
,随流动相一起进?/p>
色谱柱,
开始在固定相和流动相之间进行分配?/p>
分配系数小的组分
A
不易被固?/p>
相阻留,
较早地流出色谱柱?/p>
分配系数大的组分
C
在固定相上滞留时间长?/p>
较晚
流出色谱柱。组?/p>
B
的分配系数介?/p>
A
?/p>
C
之间,第二个流出色谱柱。若一个含
有多个组分的混合物进入系统,
则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不?/p>
先后流出色谱柱,达到分离之目的?/p>
不同组分在色谱过程中的分离情况,
首先取决于各组分在两相间的分配系数?/p>
?/p>
附能力、亲和力等是否有差异,这是热力学平衡问题,也是分离的首要条件。其
次,
当不同组分在色谱柱中运动时,
谱带随柱长展宽,
分离情况与两相之间的?/p>
散系数?/p>
固定相粒度的大小?/p>
柱的填充情况以及流动相的流速等有关?/p>
所以分?/p>
最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益?/p>
三、工作原?/p>
储液器中的流动相被高压泵打入系统
,
样品溶液经进样器进入流动?/p>
,
被流动相
载入色谱?/p>
(
固定?/p>
)
?/p>
,
由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配
系数
,
在两相中作相对运动时
,
经过反复多次的吸?/p>
-
解吸的分配过?/p>
,
?/p>
组分在移动速度上产生较大的差别
,
被分离成单个组分依次从柱内流?/p>
,
?/p>
过检测器?/p>
,
样品浓度被转换成电信号传送到记录?/p>
,
数据以图谱形式打印出
来?/p>
四?/p>
HPLC
的特点和优点
HPLC
有以下特点:
高压——压力可?/p>
150~300
Kg/cm2
。色谱柱每米降压?/p>
75
Kg/cm2
以上?/p>
高速——流速为
0.1~10.0
ml/min
?/p>
高效——可?/p>
5000
塔板每米。在一根柱中同时分离成份可?/p>
100
种?/p>
高灵敏度——紫外检测器灵敏度可?/p>
0.01ng
。同时消耗样品少?/p>
HPLC
与经典液相色谱相比有以下优点?/p>