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一、基本原?/p>

 

高效液相色谱

?/p>

HPLC

?/p>

法是以高压下的液体为流动相,

并采用颗粒极细的高效?/p>

定相的柱色谱分离技术?/p>

高效液相色谱对样品的适用性广?/p>

不受分析对象挥发?/p>

和热稳定性的限制?/p>

因而弥补了气相色谱法的不足?/p>

在目前已知的有机化合物中?/p>

可用气相色谱分析的约?/p>

20%

,?/p>

80%

则需用高效液相色谱来分析?/p>

 

 

 

高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同?/p>

它们之间的重大差别在

于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别?/p>

 

 

 

 

 

二、高效液相色谱分析原?/p>

 

?/p>

1

)、高效液相色谱分析的流程:由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统,然后

输出,经流量与压力测量之后,导入进样器。被测物由进样器注入,并随流动相

通过色谱柱,

在柱上进行分离后进入检测器?/p>

检测信号由数据处理设备采集与处

理,

并记录色谱图?/p>

废液流入废液瓶?/p>

遇到复杂的混合物分离

(极性范围比较宽?/p>

还可用梯度控制器作梯度洗脱?/p>

这和气相色谱的程序升温类似,

不同的是气相?/p>

谱改变温度,?/p>

HPLC

改变的是流动相极性,使样品各组分在最佳条件下得以?/p>

离?/p>

 

 

 

?/p>

2

)、高效液相色谱的分离过程:同其他色谱过程一样,

HPLC

也是溶质在固?/p>

相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程?/p>

它借溶质在两相间分配系数?/p>

?/p>

和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以?/p>

离?/p>

 

 

 

开始样品加在柱头上,假设样品中含有

3

个组分,

A

?/p>

B

?/p>

C

,随流动相一起进?/p>

色谱柱,

开始在固定相和流动相之间进行分配?/p>

分配系数小的组分

A

不易被固?/p>

相阻留,

较早地流出色谱柱?/p>

分配系数大的组分

C

在固定相上滞留时间长?/p>

较晚

流出色谱柱。组?/p>

B

的分配系数介?/p>

A

?/p>

C

之间,第二个流出色谱柱。若一个含

有多个组分的混合物进入系统,

则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不?/p>

先后流出色谱柱,达到分离之目的?/p>

 

不同组分在色谱过程中的分离情况,

首先取决于各组分在两相间的分配系数?/p>

?/p>

附能力、亲和力等是否有差异,这是热力学平衡问题,也是分离的首要条件。其

次,

当不同组分在色谱柱中运动时,

谱带随柱长展宽,

分离情况与两相之间的?/p>

散系数?/p>

固定相粒度的大小?/p>

柱的填充情况以及流动相的流速等有关?/p>

所以分?/p>

最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益?/p>

 

三、工作原?/p>

 

储液器中的流动相被高压泵打入系统

,

样品溶液经进样器进入流动?/p>

,

被流动相

载入色谱?/p>

(

固定?/p>

) 

?/p>

, 

由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配

系数

, 

在两相中作相对运动时

, 

经过反复多次的吸?/p>

- 

解吸的分配过?/p>

,

?/p>

组分在移动速度上产生较大的差别

, 

被分离成单个组分依次从柱内流?/p>

, 

?/p>

过检测器?/p>

, 

样品浓度被转换成电信号传送到记录?/p>

,

数据以图谱形式打印出

来?/p>

 

四?/p>

HPLC

的特点和优点

 

 

HPLC

有以下特点:

 

 

高压——压力可?/p>

150~300 

Kg/cm2

。色谱柱每米降压?/p>

75 

Kg/cm2

以上?/p>

 

 

高速——流速为

0.1~10.0 

ml/min

?/p>

 

 

 

高效——可?/p>

5000

塔板每米。在一根柱中同时分离成份可?/p>

100

种?/p>

 

 

高灵敏度——紫外检测器灵敏度可?/p>

0.01ng

。同时消耗样品少?/p>

 

 

HPLC

与经典液相色谱相比有以下优点?/p>

 

 

 

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一、基本原?/p>

 

高效液相色谱

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HPLC

?/p>

法是以高压下的液体为流动相,

并采用颗粒极细的高效?/p>

定相的柱色谱分离技术?/p>

高效液相色谱对样品的适用性广?/p>

不受分析对象挥发?/p>

和热稳定性的限制?/p>

因而弥补了气相色谱法的不足?/p>

在目前已知的有机化合物中?/p>

可用气相色谱分析的约?/p>

20%

,?/p>

80%

则需用高效液相色谱来分析?/p>

 

 

 

高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同?/p>

它们之间的重大差别在

于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别?/p>

 

 

 

 

 

二、高效液相色谱分析原?/p>

 

?/p>

1

)、高效液相色谱分析的流程:由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统,然后

输出,经流量与压力测量之后,导入进样器。被测物由进样器注入,并随流动相

通过色谱柱,

在柱上进行分离后进入检测器?/p>

检测信号由数据处理设备采集与处

理,

并记录色谱图?/p>

废液流入废液瓶?/p>

遇到复杂的混合物分离

(极性范围比较宽?/p>

还可用梯度控制器作梯度洗脱?/p>

这和气相色谱的程序升温类似,

不同的是气相?/p>

谱改变温度,?/p>

HPLC

改变的是流动相极性,使样品各组分在最佳条件下得以?/p>

离?/p>

 

 

 

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2

)、高效液相色谱的分离过程:同其他色谱过程一样,

HPLC

也是溶质在固?/p>

相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程?/p>

它借溶质在两相间分配系数?/p>

?/p>

和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以?/p>

离?/p>

 

 

 

开始样品加在柱头上,假设样品中含有

3

个组分,

A

?/p>

B

?/p>

C

,随流动相一起进?/p>

色谱柱,

开始在固定相和流动相之间进行分配?/p>

分配系数小的组分

A

不易被固?/p>

相阻留,

较早地流出色谱柱?/p>

分配系数大的组分

C

在固定相上滞留时间长?/p>

较晚

流出色谱柱。组?/p>

B

的分配系数介?/p>

A

?/p>

C

之间,第二个流出色谱柱。若一个含

有多个组分的混合物进入系统,

则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不?/p>

先后流出色谱柱,达到分离之目的?/p>

 

不同组分在色谱过程中的分离情况,

首先取决于各组分在两相间的分配系数?/p>

?/p>

附能力、亲和力等是否有差异,这是热力学平衡问题,也是分离的首要条件。其

次,

当不同组分在色谱柱中运动时,

谱带随柱长展宽,

分离情况与两相之间的?/p>

散系数?/p>

固定相粒度的大小?/p>

柱的填充情况以及流动相的流速等有关?/p>

所以分?/p>

最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益?/p>

 

三、工作原?/p>

 

储液器中的流动相被高压泵打入系统

,

样品溶液经进样器进入流动?/p>

,

被流动相

载入色谱?/p>

(

固定?/p>

) 

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, 

由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配

系数

, 

在两相中作相对运动时

, 

经过反复多次的吸?/p>

- 

解吸的分配过?/p>

,

?/p>

组分在移动速度上产生较大的差别

, 

被分离成单个组分依次从柱内流?/p>

, 

?/p>

过检测器?/p>

, 

样品浓度被转换成电信号传送到记录?/p>

,

数据以图谱形式打印出

来?/p>

 

四?/p>

HPLC

的特点和优点

 

 

HPLC

有以下特点:

 

 

高压——压力可?/p>

150~300 

Kg/cm2

。色谱柱每米降压?/p>

75 

Kg/cm2

以上?/p>

 

 

高速——流速为

0.1~10.0 

ml/min

?/p>

 

 

 

高效——可?/p>

5000

塔板每米。在一根柱中同时分离成份可?/p>

100

种?/p>

 

 

高灵敏度——紫外检测器灵敏度可?/p>

0.01ng

。同时消耗样品少?/p>

 

 

HPLC

与经典液相色谱相比有以下优点?/p>

 

 

 

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一、基本原?/p>

 

高效液相色谱

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HPLC

?/p>

法是以高压下的液体为流动相,

并采用颗粒极细的高效?/p>

定相的柱色谱分离技术?/p>

高效液相色谱对样品的适用性广?/p>

不受分析对象挥发?/p>

和热稳定性的限制?/p>

因而弥补了气相色谱法的不足?/p>

在目前已知的有机化合物中?/p>

可用气相色谱分析的约?/p>

20%

,?/p>

80%

则需用高效液相色谱来分析?/p>

 

 

 

高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同?/p>

它们之间的重大差别在

于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别?/p>

 

 

 

 

 

二、高效液相色谱分析原?/p>

 

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1

)、高效液相色谱分析的流程:由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统,然后

输出,经流量与压力测量之后,导入进样器。被测物由进样器注入,并随流动相

通过色谱柱,

在柱上进行分离后进入检测器?/p>

检测信号由数据处理设备采集与处

理,

并记录色谱图?/p>

废液流入废液瓶?/p>

遇到复杂的混合物分离

(极性范围比较宽?/p>

还可用梯度控制器作梯度洗脱?/p>

这和气相色谱的程序升温类似,

不同的是气相?/p>

谱改变温度,?/p>

HPLC

改变的是流动相极性,使样品各组分在最佳条件下得以?/p>

离?/p>

 

 

 

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2

)、高效液相色谱的分离过程:同其他色谱过程一样,

HPLC

也是溶质在固?/p>

相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程?/p>

它借溶质在两相间分配系数?/p>

?/p>

和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以?/p>

离?/p>

 

 

 

开始样品加在柱头上,假设样品中含有

3

个组分,

A

?/p>

B

?/p>

C

,随流动相一起进?/p>

色谱柱,

开始在固定相和流动相之间进行分配?/p>

分配系数小的组分

A

不易被固?/p>

相阻留,

较早地流出色谱柱?/p>

分配系数大的组分

C

在固定相上滞留时间长?/p>

较晚

流出色谱柱。组?/p>

B

的分配系数介?/p>

A

?/p>

C

之间,第二个流出色谱柱。若一个含

有多个组分的混合物进入系统,

则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不?/p>

先后流出色谱柱,达到分离之目的?/p>

 

不同组分在色谱过程中的分离情况,

首先取决于各组分在两相间的分配系数?/p>

?/p>

附能力、亲和力等是否有差异,这是热力学平衡问题,也是分离的首要条件。其

次,

当不同组分在色谱柱中运动时,

谱带随柱长展宽,

分离情况与两相之间的?/p>

散系数?/p>

固定相粒度的大小?/p>

柱的填充情况以及流动相的流速等有关?/p>

所以分?/p>

最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益?/p>

 

三、工作原?/p>

 

储液器中的流动相被高压泵打入系统

,

样品溶液经进样器进入流动?/p>

,

被流动相

载入色谱?/p>

(

固定?/p>

) 

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, 

由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配

系数

, 

在两相中作相对运动时

, 

经过反复多次的吸?/p>

- 

解吸的分配过?/p>

,

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组分在移动速度上产生较大的差别

, 

被分离成单个组分依次从柱内流?/p>

, 

?/p>

过检测器?/p>

, 

样品浓度被转换成电信号传送到记录?/p>

,

数据以图谱形式打印出

来?/p>

 

四?/p>

HPLC

的特点和优点

 

 

HPLC

有以下特点:

 

 

高压——压力可?/p>

150~300 

Kg/cm2

。色谱柱每米降压?/p>

75 

Kg/cm2

以上?/p>

 

 

高速——流速为

0.1~10.0 

ml/min

?/p>

 

 

 

高效——可?/p>

5000

塔板每米。在一根柱中同时分离成份可?/p>

100

种?/p>

 

 

高灵敏度——紫外检测器灵敏度可?/p>

0.01ng

。同时消耗样品少?/p>

 

 

HPLC

与经典液相色谱相比有以下优点?/p>

 

 

 

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(干货)液相色谱基础知识大全 - 百度文库
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高效液相色谱

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HPLC

?/p>

法是以高压下的液体为流动相,

并采用颗粒极细的高效?/p>

定相的柱色谱分离技术?/p>

高效液相色谱对样品的适用性广?/p>

不受分析对象挥发?/p>

和热稳定性的限制?/p>

因而弥补了气相色谱法的不足?/p>

在目前已知的有机化合物中?/p>

可用气相色谱分析的约?/p>

20%

,?/p>

80%

则需用高效液相色谱来分析?/p>

 

 

 

高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同?/p>

它们之间的重大差别在

于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别?/p>

 

 

 

 

 

二、高效液相色谱分析原?/p>

 

?/p>

1

)、高效液相色谱分析的流程:由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统,然后

输出,经流量与压力测量之后,导入进样器。被测物由进样器注入,并随流动相

通过色谱柱,

在柱上进行分离后进入检测器?/p>

检测信号由数据处理设备采集与处

理,

并记录色谱图?/p>

废液流入废液瓶?/p>

遇到复杂的混合物分离

(极性范围比较宽?/p>

还可用梯度控制器作梯度洗脱?/p>

这和气相色谱的程序升温类似,

不同的是气相?/p>

谱改变温度,?/p>

HPLC

改变的是流动相极性,使样品各组分在最佳条件下得以?/p>

离?/p>

 

 

 

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2

)、高效液相色谱的分离过程:同其他色谱过程一样,

HPLC

也是溶质在固?/p>

相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程?/p>

它借溶质在两相间分配系数?/p>

?/p>

和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以?/p>

离?/p>

 

 

 

开始样品加在柱头上,假设样品中含有

3

个组分,

A

?/p>

B

?/p>

C

,随流动相一起进?/p>

色谱柱,

开始在固定相和流动相之间进行分配?/p>

分配系数小的组分

A

不易被固?/p>

相阻留,

较早地流出色谱柱?/p>

分配系数大的组分

C

在固定相上滞留时间长?/p>

较晚

流出色谱柱。组?/p>

B

的分配系数介?/p>

A

?/p>

C

之间,第二个流出色谱柱。若一个含

有多个组分的混合物进入系统,

则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不?/p>

先后流出色谱柱,达到分离之目的?/p>

 

不同组分在色谱过程中的分离情况,

首先取决于各组分在两相间的分配系数?/p>

?/p>

附能力、亲和力等是否有差异,这是热力学平衡问题,也是分离的首要条件。其

次,

当不同组分在色谱柱中运动时,

谱带随柱长展宽,

分离情况与两相之间的?/p>

散系数?/p>

固定相粒度的大小?/p>

柱的填充情况以及流动相的流速等有关?/p>

所以分?/p>

最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益?/p>

 

三、工作原?/p>

 

储液器中的流动相被高压泵打入系统

,

样品溶液经进样器进入流动?/p>

,

被流动相

载入色谱?/p>

(

固定?/p>

) 

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, 

由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配

系数

, 

在两相中作相对运动时

, 

经过反复多次的吸?/p>

- 

解吸的分配过?/p>

,

?/p>

组分在移动速度上产生较大的差别

, 

被分离成单个组分依次从柱内流?/p>

, 

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过检测器?/p>

, 

样品浓度被转换成电信号传送到记录?/p>

,

数据以图谱形式打印出

来?/p>

 

四?/p>

HPLC

的特点和优点

 

 

HPLC

有以下特点:

 

 

高压——压力可?/p>

150~300 

Kg/cm2

。色谱柱每米降压?/p>

75 

Kg/cm2

以上?/p>

 

 

高速——流速为

0.1~10.0 

ml/min

?/p>

 

 

 

高效——可?/p>

5000

塔板每米。在一根柱中同时分离成份可?/p>

100

种?/p>

 

 

高灵敏度——紫外检测器灵敏度可?/p>

0.01ng

。同时消耗样品少?/p>

 

 

HPLC

与经典液相色谱相比有以下优点?/p>

 

 

 



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