实验常用试剂、缓冲液的配制方æ³?/p>
1
�/p>
1M Tris-HCl
â–?/p>
组份浓度
1 M Tris-HCl
ï¼?/p>
pH7.4
ï¼?/p>
7.6
ï¼?/p>
8.0
ï¼?/p>
â–?/p>
配制é‡?/p>
1L
â–?/p>
配置方法
1.
称量
121.1gTris
置于
1L
烧杯中ã€?/p>
2.
加入çº?/p>
800mL
的去离子水,充分搅拌溶解ã€?/p>
3.
按下表量加入浓盐酸调节所需要的
pH
值ã€?/p>
pH
�/p>
æµ?/p>
HCl
7.4
�/p>
70mL
7.6
�/p>
60mL
8.0
�/p>
42mL
4.
将溶解定容至
1L
�/p>
5.
高温高压灭菌后,室温保存ã€?/p>
注意:应使溶液冷却至室温后再调定
pH
值,因为
Tris
溶液çš?/p>
pH
值随温度的变化差很大,温度每升高
1
℃,溶液çš?/p>
pH
值大约降ä½?/p>
0.03
个单位ã€?/p>
2
�/p>
1.5 M Tris-HCl
â–?/p>
组份浓度
1.5 M Tris-HCl
ï¼?/p>
pH8.8
ï¼?/p>
â–?/p>
配制é‡?/p>
1L
â–?/p>
配置方法
1.
称取
181.7gTris
置于
1L
烧杯中ã€?/p>
2.
加入çº?/p>
800mL
的去离子水,充分搅拌溶解ã€?/p>
3.
用浓盐酸è°?/p>
pH
值至
8.8
�/p>
4.
将溶液定容至
1L
�/p>
5.
高温高压灭菌后,室温保存ã€?/p>
注意:应使溶液冷却至室温后再调定
pH
值,因为
Tris
溶液çš?/p>
pH
值随温度的变化差异很大,温度每升é«?/p>
1
℃,溶液çš?/p>
pH
值大çº?/p>
降低
0.03
个单位ã€?/p>
3
�/p>
10×
TE Buffer
â–?/p>
组份浓度
100 mM Tris-HCl
ï¼?/p>
10 mM EDTA
ï¼?/p>
pH 7.4
ï¼?/p>
7.6
ï¼?/p>
8.0
ï¼?/p>
â–?/p>
配制é‡?/p>
1L
â–?/p>
配置方法
1.
量取下列溶液,置äº?/p>
1L
烧杯中ã€?/p>
1 M Tris-HCl Buffer
ï¼?/p>
pH7.4
ï¼?/p>
7.6
ï¼?/p>
8.0
ï¼?/p>
100mL
500 mM EDTA
ï¼?/p>
pH8.0
ï¼?/p>
20mL
2.
向烧杯中加入çº?/p>
800mL
的去离子水,均匀混合ã€?/p>
3.
将溶液定è‡?/p>
1L
后,高温高压灭菌ã€?/p>
4.
室温保存ã€?/p>
4
�/p>
3 M
醋酸é’?/p>
â–?/p>
组份浓度
3 M
醋酸é’?/p>
ï¼?/p>
pH5.2
ï¼?/p>
â–?/p>
配制é‡?/p>
100mL
â–?/p>
配置方法
1.
称取
40.8gNaOAc�H2O
置于
100
ï½?/p>
200mL
烧杯
中,加入çº?/p>
40mL
的去离子水搅拌溶解ã€?/p>
2.
加入冰乙酸调èŠ?/p>
pH
值至
5.2
�/p>
3.
加入去离子水将溶液定容至
100mL
�/p>
4.
高温高压灭菌后,室温保存ã€?/p>
5
�/p>
PBS Buffer
â–?/p>
组份浓度
137 mM NaCl
ï¼?/p>
2.7mM KCl
ï¼?/p>
10 mM
Na2HPO4
ï¼?/p>
2 mM KH2PO4
â–?/p>
配制é‡?/p>
1L
â–?/p>
配置方法
1.
称量下列试剂,置äº?/p>
1L
烧杯中ã€?/p>
NaCl
8 g
KCl
0.2g
Na2HPO4 1.42 g
KH2PO4
0.27g
2.
向烧杯中加入çº?/p>
800 mL
的去离子水,充分搅拌溶解ã€?/p>
3.
滴加
HCl
å°?/p>
pH
值调节至
7.4
,然后加入去离子水将溶液å®?/p>
容至
1L
�/p>
4.
高温高压灭菌后,室温保存ã€?/p>
注意ï¼?/p>
上述
PBS Buffer
中无二价阳离子,
如需要,
可在配方ä¸?/p>
补充
1mM CaCl2
å’?/p>
0.5 mM MgCl2
�/p>
6
�/p>
10 M
醋酸é“?/p>
â–?/p>
组份浓度
10 M
醋酸é“?/p>
â–?/p>
配制é‡?/p>
100mL
â–?/p>
配置方法
1.
称量
77.1g
醋酸铵置äº?/p>
100
ï½?/p>
200 mL
烧杯中,åŠ?/p>
入约
30 mL
的去离子水搅拌溶解ã€?/p>
2.
加去离子水将溶液定容è‡?/p>
100mL
�/p>
3.
使用
0.22μm
滤膜过滤除菌ã€?/p>
4.
密封瓶口于室温保存ã€?/p>
注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌ã€?/p>
7
�/p>
Tris- HCl
平衡苯酚
â–?/p>
配置方法
1.
使用原料ï¼?/p>
大多数市售液化苯酚是清亮无色的,
无需重蒸é¦?/p>
便可用于分子生物学实验ã€?/p>
但有些液化苯酚呈粉红色或黄色ï¼?/p>
应避
免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须åœ?/p>
160
℃对å…?/p>
进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,
这些氧化产物可引起磷酸二é…?/p>
键的断裂或导è‡?/p>
RNA
å’?/p>
DNA
的交联等ã€?/p>
因此ï¼?/p>
苯酚的质量对
DNA
�/p>
RNA
的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物
学实验ã€?/p>
2.
操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时
应戴手套及防护镜等ã€?/p>
所有操作均应在通风橱中进行ï¼?/p>
与苯酚接è§?/p>
过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇ã€?/p>
3.
苯酚平衡:因为在酸æ€?/p>
pH
条件ä¸?/p>
DNA
分配于有机相,因
此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使å…?/p>
pH
值达åˆ?/p>
7.8
以上,苯é…?/p>
平衡操作方法如下ï¼?/p>
â‘?/p>
液化苯酚应贮存于
-20
℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从
冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在
68
â„?/p>
水浴中使苯酚充分溶解ã€?/p>
â‘?/p>
加入羟基喹啉ï¼?/p>
8-Quinolinol
)至终浓åº?/p>
0.1
%。该化合ç‰?/p>
是一种还原剂ã€?/p>
RNA
酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂ï¼?/p>
同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相ã€?/p>
â‘?/p>
加入等体积的
1M Tris-HCl
ï¼?/p>
pH8.0
),使用磁力搅拌器搅
æ‹?/p>
15
分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相ã€?/p>
â‘?/p>
重复操作步骤③ã€?/p>