龙源期刊?/p>
http://www.qikan.com.cn
qPCR
常见问题及分析解决办?/p>
作者:
来源:《食品安全导刊?/p>
2017
年第
04
?/p>
昆山吉和力仪器有限公司(以下简?/p>
?/p>
吉和?/p>
?/p>
)是一家提供专业服务和仪器设备的集成供
应商,公司以用户实际需求为导向,提供最合适、性价比最高的仪器,致力于打造一站式服务
平台。为了让业内人士?/p>
qPCR
进行更加深入的了解,吉和力整理了一些相关常见问题,并对
这些问题一一进行了解答?/p>
qPCR
的英文全称是
Real-time Quantitative PCR Detecting System
,即实时荧光定量核酸?/p>
增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简?/p>
qPCR
?/p>
简单来说,
qPCR
就是利用荧光信号的变化,实时监测
PCR
扩增反应中每一个循环扩增产
物量的变化,通过
Ct
值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。而常规的
PCR
无法对起
始模板准确定量,无法对扩增反应实时监测?/p>
如何提高
RT-PCR
反应的灵敏度与特异性?
①确定模?/p>
RNA
完整性,?/p>
DNA
污染?/p>
?/p>
RNA
模板中不应含有扩增反应抑制剂?/p>
③为了防止模板降解,在反应体系中加入
RNase
抑制?/p>
RNasin
?/p>
④使用适量的模?/p>
RNA
,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带?/p>
弱;
⑤若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果?/p>
⑥设计引物时,避免在引物
3?/p>
端含有互补序列,避免形成内部发卡结构?/p>
避免
RNA
降解的方法有哪些?/p>
①在用来验证完整性之前先在变性胶上分?/p>
RNA
?/p>
②运用良好无污染技术分?/p>
RNA
?/p>
③将组织从动物体取出后立刻提?/p>
RNA
,并将提取好?/p>
RNA
反转录为
cDNA
进行低温?/p>
存?/p>