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龙源期刊?/p>

 http://www.qikan.com.cn 

qPCR

常见问题及分析解决办?/p>

 

作者:

 

来源:《食品安全导刊?/p>

2017

年第

04

?/p>

 

        

昆山吉和力仪器有限公司(以下简?/p>

?/p>

吉和?/p>

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)是一家提供专业服务和仪器设备的集成供

应商,公司以用户实际需求为导向,提供最合适、性价比最高的仪器,致力于打造一站式服务

平台。为了让业内人士?/p>

qPCR

进行更加深入的了解,吉和力整理了一些相关常见问题,并对

这些问题一一进行了解答?/p>

 

        qPCR

的英文全称是

Real-time Quantitative PCR Detecting System

,即实时荧光定量核酸?/p>

增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简?/p>

qPCR

?/p>

 

        

简单来说,

qPCR

就是利用荧光信号的变化,实时监测

PCR

扩增反应中每一个循环扩增产

物量的变化,通过

Ct

值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。而常规的

PCR

无法对起

始模板准确定量,无法对扩增反应实时监测?/p>

 

        

如何提高

RT-PCR

反应的灵敏度与特异性?

 

        

①确定模?/p>

RNA

完整性,?/p>

DNA

污染?/p>

 

        

?/p>

RNA

模板中不应含有扩增反应抑制剂?/p>

 

        

③为了防止模板降解,在反应体系中加入

RNase

抑制?/p>

RNasin

?/p>

 

        

④使用适量的模?/p>

RNA

,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带?/p>

弱;

 

        

⑤若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果?/p>

 

        

⑥设计引物时,避免在引物

3?/p>

端含有互补序列,避免形成内部发卡结构?/p>

 

        

避免

RNA

降解的方法有哪些?/p>

 

        

①在用来验证完整性之前先在变性胶上分?/p>

RNA

?/p>

 

        

②运用良好无污染技术分?/p>

RNA

?/p>

 

        

③将组织从动物体取出后立刻提?/p>

RNA

,并将提取好?/p>

RNA

反转录为

cDNA

进行低温?/p>

存?/p>

 

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)是一家提供专业服务和仪器设备的集成供

应商,公司以用户实际需求为导向,提供最合适、性价比最高的仪器,致力于打造一站式服务

平台。为了让业内人士?/p>

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进行更加深入的了解,吉和力整理了一些相关常见问题,并对

这些问题一一进行了解答?/p>

 

        qPCR

的英文全称是

Real-time Quantitative PCR Detecting System

,即实时荧光定量核酸?/p>

增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简?/p>

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简单来说,

qPCR

就是利用荧光信号的变化,实时监测

PCR

扩增反应中每一个循环扩增产

物量的变化,通过

Ct

值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。而常规的

PCR

无法对起

始模板准确定量,无法对扩增反应实时监测?/p>

 

        

如何提高

RT-PCR

反应的灵敏度与特异性?

 

        

①确定模?/p>

RNA

完整性,?/p>

DNA

污染?/p>

 

        

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模板中不应含有扩增反应抑制剂?/p>

 

        

③为了防止模板降解,在反应体系中加入

RNase

抑制?/p>

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④使用适量的模?/p>

RNA

,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带?/p>

弱;

 

        

⑤若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果?/p>

 

        

⑥设计引物时,避免在引物

3?/p>

端含有互补序列,避免形成内部发卡结构?/p>

 

        

避免

RNA

降解的方法有哪些?/p>

 

        

①在用来验证完整性之前先在变性胶上分?/p>

RNA

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②运用良好无污染技术分?/p>

RNA

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③将组织从动物体取出后立刻提?/p>

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)是一家提供专业服务和仪器设备的集成供

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平台。为了让业内人士?/p>

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进行更加深入的了解,吉和力整理了一些相关常见问题,并对

这些问题一一进行了解答?/p>

 

        qPCR

的英文全称是

Real-time Quantitative PCR Detecting System

,即实时荧光定量核酸?/p>

增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简?/p>

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简单来说,

qPCR

就是利用荧光信号的变化,实时监测

PCR

扩增反应中每一个循环扩增产

物量的变化,通过

Ct

值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。而常规的

PCR

无法对起

始模板准确定量,无法对扩增反应实时监测?/p>

 

        

如何提高

RT-PCR

反应的灵敏度与特异性?

 

        

①确定模?/p>

RNA

完整性,?/p>

DNA

污染?/p>

 

        

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RNA

模板中不应含有扩增反应抑制剂?/p>

 

        

③为了防止模板降解,在反应体系中加入

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抑制?/p>

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④使用适量的模?/p>

RNA

,模板量太多会降低特异性,太少会导致扩增不出条带或条带?/p>

弱;

 

        

⑤若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果?/p>

 

        

⑥设计引物时,避免在引物

3?/p>

端含有互补序列,避免形成内部发卡结构?/p>

 

        

避免

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降解的方法有哪些?/p>

 

        

①在用来验证完整性之前先在变性胶上分?/p>

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②运用良好无污染技术分?/p>

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③将组织从动物体取出后立刻提?/p>

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qPCR常见问题及分析解决办?- 百度文库
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就是利用荧光信号的变化,实时监测

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④使用适量的模?/p>

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⑤若模板中有二级结构,可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果?/p>

 

        

⑥设计引物时,避免在引物

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①在用来验证完整性之前先在变性胶上分?/p>

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