Bac-to-Bac
杆状病毒表达系统
试剂盒内容物
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Introduction
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Overview
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Bac-to-Bac
杆状病毒表达系统提供快速有效的方法产生重组杆状病毒。此方法基于让已经转入杆状病的质粒(杆粒?/p>
的位点特意转座子的表达框的质粒在
Ecoli
中扩增?/p>
Bac-to-Bac
杆状病毒表达系统主要包括?/p>
*pFastBac
捐献质粒的选择,它要能够产生包含目的位点的表达结构,这个目的基因的产生被杆状病毒特意位点启动子
控制?/p>
*
一?/p>
Ecoli
宿主?/p>
DH10Bac
?/p>
包含杆状病毒质粒
(杆粒)
和辅助质粒,
在转?/p>
pFastBac
表达结构后可以产生重组杆粒?/p>
*
一个控制表达的质粒,包?/p>
Gus
?/p>
/
?/p>
CAT
基因,以便在感染细胞后产生重组杆状病毒,表达β
-
葡萄糖酸酐酶?/p>
/
?/p>
氯霉素乙酰转移酶?/p>
Bac-to-Bac
表达系统的优?/p>
?/p>
使用这个系统产生重组杆状病毒较传统的同源重组有以下优点:
*
与使用同源重组产生重组杆状病毒所需?/p>
4-6
周相比,鉴别纯化重组病毒少于两周
*
减少了从斑点筛选重组病?/p>
DNA
所包含亲缘和非重组病毒的几?/p>
*
可以快速同时进行大量重组,适合表达功能性研究的蛋白
选择
pFastBac
菌体?/p>
Vector
?/p>
?/p>
大量?/p>
pFastBac
菌体都适于进行
Bac-to-Bac
表达系统。选择对于你的需要最合适的菌体?/p>
Vector
特点
参?/p>
pFastBac
TM
1
高水平表达的?/p>
AcMNPV
?/p>
乙烯?/p>
PH
)启动子
用于简单克隆的大量克隆?/p>
?/p>
Anderon 1996
pFastBac
TM
HT
高水平表达的聚乙烯启动子?/p>
N-
末端含有
6XHis
?/p>
可以用来
纯化重组蛋白,并可用
TEV
蛋白酶切去;
提供
3
个阅读框
Polayes 1996
pFastBac
TM
Dual
两个强启动子?/p>
PH
?/p>
p10
?
Harris
?/p>
Polaye 1997