葡聚糖凝胶层析实验报?/p>
一、实验目?/p>
1
、学习凝?/p>
(Gel)
层析法的基本原理?/p>
2
、掌握葡聚糖凝胶?/p>
Sephadex
)柱层析的操作技术?/p>
二、实验原?/p>
凝胶层析又称排阻层析?/p>
凝胶过滤?/p>
渗透层析或分子筛层析等
?/p>
对于某种型号的凝胶,
一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被?/p>
阻在外,
只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外
(所用洗脱液的体积为外水
体积?/p>
;而一些小分子不被排阻,可自由扩散,渗透进入凝胶内部的
筛孔?/p>
尔后又被流出的洗脱液带走
(所用洗脱液的体积为内水体积?/p>
?/p>
分子越小,进入凝胶内部越深,所走的路程越多,故小分子最后流?/p>
柱外?/p>
而大分子先从柱中流出?/p>
一些中等大小的分子介于大分子与?/p>
分子之间,只能进入一部分凝胶较大的孔隙,亦即部分排阻,因此这
些分子从柱中流出的顺序也介于大?/p>
小分子之间?/p>
这样样品经过凝胶
层析后,分子便按照从大到小的顺序依次流出,达到分离的目的?/p>
三、仪器、材料和试剂
1
、仪器:内直径为
1cm
,外直径?/p>
1.5cm
的层析柱,恒流泵、收集器?/p>
酶标仪、试管、烧杯、移液枪?/p>
2
、材料与试剂:交联葡聚糖、双蒸水、蛋白溶液样品?/p>
四、实验步?/p>
1
、装?/p>
将交联葡聚糖溶液用玻璃棒引流导入层析柱中?/p>
要注意,
不能?