1.
酶生物合成法生产的主要工艺过程包括那几个步骤ï¼?/p>
(1)
用作培养菌种及扩大生产的发酵罐的培养基的配制
(2)
培养基、发酵罐以及辅助设备的消毒灭è�?/p>
(3)
将已培养好的有活性的纯菌株以一定量转接到发酵罐ä¸?/p>
(4)
接种到发酵罐中的菌株控制在最适条件下生长并形成代谢产ç‰?/p>
(5)
将产物抽提并进行精制
(6)
回收或处理发酵过程中产生的废物和废水
2.
如何控制微生物发酵产酶的工艺条件ï¼?/p>
发酵过程中,为了能对生产过程进行必要的控制,需要对有关工艺参数进行定期取样测定或进行连
续测量。参数中,对发酵过程影响较大的有温度、PH、溶解氧浓度等ã€?/p>
(1)
温度
:
温度对发酵的影响是多方面的,主要表现在对细胞生长、产物形成、发酵液的物理性质和生
物合成方面。例如:枯草杆菌的最适温度为
34--37
℃,黑曲霉的最适温度为
28--32
â„?/p>
(2)pH:
发酵过程ä¸?/p>
pH
的变化取决于所用的菌种、培养基的成分和培养条件。微生物生长和生物合æˆ?/p>
都有其最适和能够耐受çš?/p>
pH
范围ï¼?/p>
大多数微生物生长的最é€?/p>
pH6.3-7.5
ï¼?/p>
霉菌和酵母生长的最é€?/p>
pH4-6
,放线菌生长的最é€?/p>
pH7-8
�/p>
(3)
溶解氧浓åº?/p>
:
对于好氧发酵,溶解氧浓度是最重要的参数之一。好氧性微生物深层培养时,需要é€?/p>
量的溶解氧以维持其呼吸代谢和某些产物的合成,氧的不足会造成代谢异常,产量降低ã€?/p>
简述凝胶层析、亲和层析、离子交换层析的原理和操作要点?
离子交换层析原理:根据待分离物质带电性质不同的分离纯化方法ã€?/p>
操作
:a
上样:上样体积不十分严格ã€?/p>
b
洗脱
:
增加溶液的离子强åº?/p>
c
梯度洗脱æ³?/p>
:
改变溶液çš?/p>
pH
d
再生:用
0.5mol/LNaOH
å’?/p>
0.5mol/L NaCl
混合溶液æˆ?/p>
0.5mol/L HCl
处理ã€?/p>
凝胶层析原理:利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。大分子物质不能进入凝胶
孔内,在凝胶颗粒之间的空隙向下移动,并最先被洗脱出来;小分子物质可自由出
入凝胶孔,流程长而后流出层析柱ã€?/p>
操作ï¼?/p>
a
凝胶的选择和处ç�?/p>
,
根据相对分子质量范围选择相应型号的凝胶介质ã€?/p>
将干胶悬浮于
5-10
倍的蒸馏水中
,充分溶胀,抽气,装柱ã€?/p>
b
柱的选择
:
采用
L/D
比值高的柱子,可提é«?/p>
分辨率,
但影响流速ã€?/p>
c
加样
:
体积不能过多ï¼?/p>
不超过凝胶床体积çš?/p>
5
%,
脱盐时可åœ?/p>
10
ï¼?/p>
左右ã€?/p>
d
洗脱
:
洗脱液与平衡时用çš?/p>
buffer
一致。洗速不可过快,保持恒速ã€?/p>
e
胶的保存
:
洗脱完毕后,凝胶柱已恢复到上柱前的状态,不必再生处理ã€?/p>
亲和层析原理
:
利用生物大分子间特异的亲和力来纯化生物大分子
.
体通过适当的化学反应共价的è¿?
接到载体上,待纯化的物质可被配体吸附,杂质则不被吸附,从层析柱流出,变换洗脱
条件,即可将分离的物质洗脱下来,实现分离提纯ã€?/p>
简述凝胶电泳的分类及其原理ï¼?/p>
琼脂糖凝胶电泳:一般用于核酸的分离分析。琼脂糖凝胶孔径度较大,对大部分蛋白质只有很小的
分子筛效应ã€?/p>
聚丙烯酰胺凝胶电泳:可用于核酸和蛋白质的分离、纯化及检测。分辨率较高ã€?/p>
简述酶结晶的主要方法和原理ï¼?/p>
ï¼?/p>
1
)盐析结晶法:在适当的温度和PH值等条件下,于接近饱和的酶液中缓慢增加某种中性盐的浓
度,使酶的溶解度缓慢降低,达到稍微过饱和状态,而析出酶晶体的过ç¨?/p>
(2)有机溶剂结晶法:在接近饱和的酶液中缓慢增加某种有机溶剂,使酶的溶解度缓慢降低,而析
出酶晶体的过ç¨?/p>
(3)透析平衡结晶法:将酶液装进透析袋,对一定浓度的盐溶液进行透析,使酶液逐步达到过饱å’?