献给初学者:大神教你瞬时转染快,准,?/p>
一般情况下?/p>
瞬时转染是将
DNA
导入真核细胞的方?/p>
之一。在瞬时转染中,重组
DNA
导入感染性强的细胞系?/p>
获得目的基因暂时但高水平的表达?/p>
转染?/p>
DNA
不必整合到宿主染色体?/p>
可在比稳定转染较?/p>
时间内(最多一周左右)收获转染的细胞,并对溶解产物?/p>
目的基因的表达进行检测?/p>
如果过表达基因用质粒,如果敲降用的是
siRNA(
?/p>
microRNA
实验中,过表达用的是
mimics
,敲降用的是
inhibitor)
?/p>
通过瞬时转染,将目的基因敲降或者过表达?/p>
gain and loss
实验?/p>
,观察下游靶基因的表达情况,或者细胞表?/p>
?/p>
phenotype
)的变化,例如凋亡,周期,增殖,侵袭,转
移等。那该怎么做呢
01
实验前准?/p>
lipofectamine2000
(转染试剂)
(避光)
?/p>
Opti-MEMI
减血?/p>
培养?/p>
(避光)
?/p>
目的基因的质粒或?/p>
siRNA
(以
siRNA
?/p>
例)
,细胞,六孔板,培养基,以及一些细胞实验所需的普
通物品?/p>
02