献给初学者:大神教你瞬时转染快,准,ç‹?/p>
一般情况下,瞬时转染是å°?/p>
DNA
导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组
DNA
导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达ã€?/p>
转染çš?/p>
DNA
不必整合到宿主染色体,可在比稳定转染较短时间内(最多一周左右)
收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测ã€?/p>
如果过表达基因用质粒ï¼?/p>
如果敲降用的æ˜?/p>
siRNA(
�/p>
microRNA
实验中,
过表达用çš?/p>
�/p>
mimics
,敲降用的是
inhibitor)
�/p>
通过瞬时转染,将目的基因敲降或者过表达ï¼?/p>
gain and loss
实验ï¼?/p>
,观察下游靶基因
的表达情况,或者细胞表型(
phenotype
)的变化,例如凋亡,周期,增殖,侵袭,转ç§?/p>
等。那该怎么做呢
01
实验前准å¤?/p>
lipofectamine2000
(转染试剂)
(避光)
ï¼?/p>
Opti-MEMI
减血清培养基(避光)
,目çš?/p>
基因的质粒或è€?/p>
siRNA
(以
siRNA
为例ï¼?/p>
,细胞,六孔板,培养基,以及一些细胞实éª?/p>
所需的普通物品ã€?/p>
02
步骤