天津现代职业技术学?/p>
1
3,5-
二硝基水杨酸
(DNS)
法测定糖化酶活力
一、原?/p>
糖化酶有催化淀粉水解的作用,能从淀粉分子非还原性末端开始,分解α
-1,4-
葡萄糖苷键生成葡萄糖。在煮沸条件下,葡萄糖在碱性介质中?/p>
3,5-
二硝
基水杨酸
(DNS)
氧化成葡萄糖酸,
?/p>
3,5-
二硝基水杨酸被还原成红褐色的
3-
氨基
-5-
硝基水杨酸?/p>
在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比?/p>
系,利用分光光度计,?/p>
540nm
波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,?/p>
可求出淀粉经糖化酶水解后产生的葡萄糖总量?/p>
由于多糖水解为单糖时?/p>
每断?/p>
一个糖苷键需加入一分子水,所以在计算多糖含量时应乘以
0.9
?/p>
反应过程如下?/p>
二、仪器、试?/p>
1
、仪?/p>
1)
具塞玻璃刻度比色管:
25mL
×
19
?/p>
2)
烧杯?/p>
100mL
×
4
?/p>
3)
三角瓶:
100mL
×
1
?/p>
4)
容量瓶:
100mL
×
3
?/p>
50mL
×
3
?/p>
5)
刻度吸管?/p>
1mL
×
4
?/p>
2mL
×
3
?/p>
10mL
×
1
?/p>
6)
沸水浴;
7)
冰浴?/p>
8)
扭力天平?/p>
9)
UV
?/p>
2802SH
型紫外可见分光光度计
尤尼柯(上海)仪器有限公司;
2
、试?/p>