一
.
组织
RNA
提取
1.
最好新鲜组织,这样
RNA
提取的效果比较好,这是肯定的?/p>
2.
如果不是新鲜的(最好在半年之内?/p>
-
80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不
要反复冻融,
从冰冻状态拿?/p>
0-
4℃,
注意不要拿到常温?/p>
待组织解冻后?/p>
?/p>
DEPC
泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量?/p>
TRIZOL
试剂,然后匀浆?/p>
注意:速度不要太快,要匀一会挺一会,否则由于摩擦产热?/p>
RNA
遇热会加速降
解。如果一次做多个标本?/p>
RNA
提取,也要这样做,更不能急。后面的步骤和细
?/p>
RNA
提取一样?/p>
?/p>
.
培养细胞?/p>
RNA
提取
1.
贴壁细胞,需要先用胰酶消化后,然后收集到
离心?/p>
中,离心,去上清,然?/p>
?/p>
PBS
多洗
2-3
次,以去除多余的胰酶?/p>
悬浮细胞?/p>
直接?/p>
吸管
或者加样枪吹打评壁?/p>
以使细胞基本可以被吹下来?/p>
然后
离心去上清,不需要用
PBS
洗?/p>
2.
然后将少量细胞悬液转移到预冷?/p>
DEPC
泡过?/p>
1.5
毫升
EP
管中?/p>
然后加入一
定量?/p>
TRIZOL(
细胞多的话加
1
毫升,细胞少的话?/p>
0.5
毫升就可?/p>
)
,然后用
枪头吹打混匀
5-10
分钟。(如果有时间就继续往下做,如果没有时间,可以?/p>
加了
TRIZOL
后的细胞裂解液冻存到
-
80℃,用的时候提取和新的提取的效果一
样。)在冰上操作?/p>
3.
上面的混匀
5-10
分钟,基本可以使细胞裂解,然后可以进行下面的步骤,详
细的步骤我就不介绍了?/p>
介绍一些需要注意的地方?/p>
1.
一定要注意冰上操作,低温离心?/p>