重组
DNA
分子的酶切、连接、转化和筛?/p>
?/p>
?/p>
:本实验利用酶切后的目的片段
?/p>
500bp
)与
puc18
为材料,?
用氯化钙法制备感受态细胞和外源的重组体
DNA
转入受体菌细胞,
经过筛选培养基筛选后得到重组子?/p>
关键?/p>
:酶?/p>
重组
筛?/p>
?/p>
言
重组克隆是指含有外源
DNA
的细胞增殖而产生的细胞群体?
或由其经生长、发育和再生而形成的组织、器官、个体。重组克隆的
筛选主要依?/p>
DNA
载体上的选择标记,加上合适的选择(培养)?/p>
件来进行?/p>
一是通过选择培养基使只有带外?/p>
DNA
的细胞才能生长;
二是根据选择性遗传标记选择带有目的基因的细胞克隆?/p>
1
材料与方?/p>
1.1
材料
质粒
DNA
、目?/p>
DNA
?/p>
E.coli
受菌体、质?/p>
pUC18
、重组体
DNA
1.2
方法
1.2.1PCR
法扩增目的片段(
CER3A
?/p>
1.2.1.1 PCR
反应体系
反应?/p>
体积
/ul
PCR Taq mix
12.5
CER3Ar
?/p>
CER3Af
?/p>
1
dd
?/p>
9.5
质粒
CER3A
1
1.2.1.2 PCR
扩增条件
?/p>
PCR
仪上设计
94
?/p>
5min
,然后进入循环,