逆转?/p>
PCR
RT-PCR
为反转录
RCR
?/p>
reverse
transcription
PCR
?/p>
和实?/p>
PCR
?/p>
real
time
PCR
?/p>
共同的缩写。逆转?/p>
PCR
,或者称反转?/p>
PCR(reverse transcription-PCR,
RT-PCR)
,是聚合酶链式反?/p>
(PCR)
的一种广泛应用的变形。在
RT-PCR
中,一?/p>
RNA
链被逆转录成为互?/p>
DNA
,再以此为模板通过
PCR
进行
DNA
扩增?/p>
逆转?/p>
PCR
由一?/p>
RNA
单链转录为互?/p>
DNA
(cDNA)
称作
?/p>
逆转?/p>
?/p>
,由依赖
RNA
?/p>
DNA
聚合?/p>
(逆转录酶?/p>
来完成?/p>
随后?/p>
DNA
的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖
RNA
?/p>
DNA
聚合酶完成,随每个循环倍增,即通常?/p>
PCR
。原先的
RNA
模板?/p>
RNA
?/p>
H
降解,留下互?/p>
DNA
?/p>
RT-PCR
的指数扩增是一种很灵敏的技术,
可以检测很低拷贝数?/p>
RNA
?/p>
RT-PCR
广泛应用于遗传病的诊断,并且可以用于定量监测某种
RNA
的含量?/p>
(检测基因表?/p>
的方法,参见
Northern Blot
法?/p>
?/p>
RT-PCR
有时候也会指代实?/p>
PCR(real-time
PCR)
。为了与逆转?/p>
PCR
相区别,
通常被写?/p>
?/p>
定量
PCR?quantitative PCR)
或?/p>
RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)
?/p>
实时
PCR
实时
PCR(real-time PCR)
,属于定?/p>
PCR
?/p>
Q-PCR
)的一种,以一定时间内
DNA
的增幅量为基础进行
DNA
的定量分析?/p>
real time PCR
的定量使用萤光色素,目前有二种方法。一种是?/p>
ds DNA
中插?/p>
特异的萤光色素;另一种使用一种能与增?/p>
DNA
序列中特定寡核酸序列相结合的一
种萤光探针(
probe
?/p>
?/p>
real
time
PCR
?/p>
reverse
transcription
PCR
相结合,能用微量?/p>
RNA
来找出特
定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种
RT PCR
的组合又被称之为
?/p>
?/p>
?/p>
RT-PCR
?/p>
quantitative RT-PCR
?/p>
?nbsp;
RT-PCR
技术相关试?/p>
oligo:
多聚体,相当?/p>
mRNA
引物
AMV
?/p>
M-MLV
?/p>
:逆转录酶
dNTP
:脱氧核苷酸
RNase
?/p>
RNA
酶抑制剂
PCR Buffer
?/p>
RT-PCR
缓冲?/p>
MgCl2
?/p>
2
价镁离子