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感受态细胞制?/p>

 

制备感受态常用的方法是电击法?/p>

CaCl

2

制备法,以下介绍

CaCl

2

制备法:

 

1

、可以从

-80

℃冰柜中?/p>

取出一支冻存菌株,

于事先照过紫外的超净台中?/p>

用无菌的接种?/p>

轻轻蘸取菌种后,

在无抗平?/p>

?/p>

由于

Rocetta

含有氯霉素抗性,

需要涂布在氯霉素抗性的?/p>

板,后面的都是如?/p>

)上划线,并将菌种迅速放?/p>

-80

℃保存,在划线板上做好相应标记,

?/p>

37

℃培养过夜?/p>

 

2

、从

37

℃培养过夜的新鲜平板上挑取一个单克隆,接种于

2mlEP

管中?/p>

37

℃,

220rpm

震荡培养?/p>

6

个小时至对数生长中后期;将该菌悬液以

1:100

的比例接种于

50ml 

LB

液体

培养基(

2

瓶)?/p>

,37

℃振荡培?/p>

2.5

小时?/p>

OD600=0.5

?/p>

 

注意:接种比例不得大?/p>

1:10

?/p>

 

3

?/p>

在无菌条件下将细菌转移到一个无菌?/p>

预冷的离心管

?/p>

50ml

?/p>

中,

在冰上放?/p>

5~10min

?/p>

 

注意:划板、接种为了防止意外发生最好多划一块平板和多接一根试管,划板、接种、转?/p>

均要严格按照无菌操作?/p>

 

4

?/p>

4

?/p>

 5000g

离心

5

分钟。用预冷的去离子水洗涤沉淀?/p>

4

?/p>

 5000g

离心

5

分钟?/p>

 

Note

:此步主要是为了洗去培养基中的盐?/p>

 

5

?/p>

沉淀加入

2ml

预冷?/p>

0.05mol/L CaCl

2

-15%

甘油混合溶液?/p>

轻吹散,

冰浴

5

分钟?/p>

4

?/p>

5000g

离心

5

分钟?/p>

 

6

、沉淀加入

2ml

预冷?/p>

0.05mol/L CaCl

2

-15%

甘油混合溶液,轻吹散,即成为感受态细?/p>

悬液。分装成

50~100

μ

l

的小份,贮存?/p>

-70

℃可保存半年?/p>

 

 

?/p>

15%

甘油?/p>

0.05mol/L CaCl

2

制备方法

: 

称取

0.28g 

CaCl

2

(

无水

,

分析?/p>

),

溶于

50ml

重蒸水中

,

加入

15ml

甘油

,

定容?/p>

100ml,

高压?/p>

菌?/p>

 

感受态细胞的特征

 

感受态:通过特殊处理使细胞处于能够吸收外?/p>

DNA

的状态。感受态细胞的特征?/p>

 

?/p>

1

)细胞表面暴露出一些可接受外来

DNA

的位点(以溶菌酶处理,可促使受体细胞的接

受位点充分暴露)

?/p>

?/p>

2

)细胞膜通透性增加(用钙离子处理,可使膜通透性增加,?/p>

DNA

直接穿过质膜进入细胞?/p>

?/p>

?/p>

3

)受体细胞的修饰酶活性最高,而限制酶活性最低,使转入的

DNA

分子不易被切除或破坏?/p>

 

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感受态细胞制?/p>

 

制备感受态常用的方法是电击法?/p>

CaCl

2

制备法,以下介绍

CaCl

2

制备法:

 

1

、可以从

-80

℃冰柜中?/p>

取出一支冻存菌株,

于事先照过紫外的超净台中?/p>

用无菌的接种?/p>

轻轻蘸取菌种后,

在无抗平?/p>

?/p>

由于

Rocetta

含有氯霉素抗性,

需要涂布在氯霉素抗性的?/p>

板,后面的都是如?/p>

)上划线,并将菌种迅速放?/p>

-80

℃保存,在划线板上做好相应标记,

?/p>

37

℃培养过夜?/p>

 

2

、从

37

℃培养过夜的新鲜平板上挑取一个单克隆,接种于

2mlEP

管中?/p>

37

℃,

220rpm

震荡培养?/p>

6

个小时至对数生长中后期;将该菌悬液以

1:100

的比例接种于

50ml 

LB

液体

培养基(

2

瓶)?/p>

,37

℃振荡培?/p>

2.5

小时?/p>

OD600=0.5

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注意:接种比例不得大?/p>

1:10

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3

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在无菌条件下将细菌转移到一个无菌?/p>

预冷的离心管

?/p>

50ml

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中,

在冰上放?/p>

5~10min

?/p>

 

注意:划板、接种为了防止意外发生最好多划一块平板和多接一根试管,划板、接种、转?/p>

均要严格按照无菌操作?/p>

 

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5

分钟。用预冷的去离子水洗涤沉淀?/p>

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分钟?/p>

 

Note

:此步主要是为了洗去培养基中的盐?/p>

 

5

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沉淀加入

2ml

预冷?/p>

0.05mol/L CaCl

2

-15%

甘油混合溶液?/p>

轻吹散,

冰浴

5

分钟?/p>

4

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5000g

离心

5

分钟?/p>

 

6

、沉淀加入

2ml

预冷?/p>

0.05mol/L CaCl

2

-15%

甘油混合溶液,轻吹散,即成为感受态细?/p>

悬液。分装成

50~100

μ

l

的小份,贮存?/p>

-70

℃可保存半年?/p>

 

 

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15%

甘油?/p>

0.05mol/L CaCl

2

制备方法

: 

称取

0.28g 

CaCl

2

(

无水

,

分析?/p>

),

溶于

50ml

重蒸水中

,

加入

15ml

甘油

,

定容?/p>

100ml,

高压?/p>

菌?/p>

 

感受态细胞的特征

 

感受态:通过特殊处理使细胞处于能够吸收外?/p>

DNA

的状态。感受态细胞的特征?/p>

 

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1

)细胞表面暴露出一些可接受外来

DNA

的位点(以溶菌酶处理,可促使受体细胞的接

受位点充分暴露)

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2

)细胞膜通透性增加(用钙离子处理,可使膜通透性增加,?/p>

DNA

直接穿过质膜进入细胞?/p>

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3

)受体细胞的修饰酶活性最高,而限制酶活性最低,使转入的

DNA

分子不易被切除或破坏?/p>

 

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制备感受态常用的方法是电击法?/p>

CaCl

2

制备法,以下介绍

CaCl

2

制备法:

 

1

、可以从

-80

℃冰柜中?/p>

取出一支冻存菌株,

于事先照过紫外的超净台中?/p>

用无菌的接种?/p>

轻轻蘸取菌种后,

在无抗平?/p>

?/p>

由于

Rocetta

含有氯霉素抗性,

需要涂布在氯霉素抗性的?/p>

板,后面的都是如?/p>

)上划线,并将菌种迅速放?/p>

-80

℃保存,在划线板上做好相应标记,

?/p>

37

℃培养过夜?/p>

 

2

、从

37

℃培养过夜的新鲜平板上挑取一个单克隆,接种于

2mlEP

管中?/p>

37

℃,

220rpm

震荡培养?/p>

6

个小时至对数生长中后期;将该菌悬液以

1:100

的比例接种于

50ml 

LB

液体

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2

瓶)?/p>

,37

℃振荡培?/p>

2.5

小时?/p>

OD600=0.5

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注意:接种比例不得大?/p>

1:10

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3

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在无菌条件下将细菌转移到一个无菌?/p>

预冷的离心管

?/p>

50ml

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中,

在冰上放?/p>

5~10min

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注意:划板、接种为了防止意外发生最好多划一块平板和多接一根试管,划板、接种、转?/p>

均要严格按照无菌操作?/p>

 

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 5000g

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5

分钟。用预冷的去离子水洗涤沉淀?/p>

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5

分钟?/p>

 

Note

:此步主要是为了洗去培养基中的盐?/p>

 

5

?/p>

沉淀加入

2ml

预冷?/p>

0.05mol/L CaCl

2

-15%

甘油混合溶液?/p>

轻吹散,

冰浴

5

分钟?/p>

4

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5000g

离心

5

分钟?/p>

 

6

、沉淀加入

2ml

预冷?/p>

0.05mol/L CaCl

2

-15%

甘油混合溶液,轻吹散,即成为感受态细?/p>

悬液。分装成

50~100

μ

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的小份,贮存?/p>

-70

℃可保存半年?/p>

 

 

?/p>

15%

甘油?/p>

0.05mol/L CaCl

2

制备方法

: 

称取

0.28g 

CaCl

2

(

无水

,

分析?/p>

),

溶于

50ml

重蒸水中

,

加入

15ml

甘油

,

定容?/p>

100ml,

高压?/p>

菌?/p>

 

感受态细胞的特征

 

感受态:通过特殊处理使细胞处于能够吸收外?/p>

DNA

的状态。感受态细胞的特征?/p>

 

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1

)细胞表面暴露出一些可接受外来

DNA

的位点(以溶菌酶处理,可促使受体细胞的接

受位点充分暴露)

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2

)细胞膜通透性增加(用钙离子处理,可使膜通透性增加,?/p>

DNA

直接穿过质膜进入细胞?/p>

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)受体细胞的修饰酶活性最高,而限制酶活性最低,使转入的

DNA

分子不易被切除或破坏?/p>

 

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感受态细胞制备及各种感受态的特点 - 百度文库
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感受态细胞制?/p>

 

制备感受态常用的方法是电击法?/p>

CaCl

2

制备法,以下介绍

CaCl

2

制备法:

 

1

、可以从

-80

℃冰柜中?/p>

取出一支冻存菌株,

于事先照过紫外的超净台中?/p>

用无菌的接种?/p>

轻轻蘸取菌种后,

在无抗平?/p>

?/p>

由于

Rocetta

含有氯霉素抗性,

需要涂布在氯霉素抗性的?/p>

板,后面的都是如?/p>

)上划线,并将菌种迅速放?/p>

-80

℃保存,在划线板上做好相应标记,

?/p>

37

℃培养过夜?/p>

 

2

、从

37

℃培养过夜的新鲜平板上挑取一个单克隆,接种于

2mlEP

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37

℃,

220rpm

震荡培养?/p>

6

个小时至对数生长中后期;将该菌悬液以

1:100

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50ml 

LB

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2

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,37

℃振荡培?/p>

2.5

小时?/p>

OD600=0.5

?/p>

 

注意:接种比例不得大?/p>

1:10

?/p>

 

3

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在无菌条件下将细菌转移到一个无菌?/p>

预冷的离心管

?/p>

50ml

?/p>

中,

在冰上放?/p>

5~10min

?/p>

 

注意:划板、接种为了防止意外发生最好多划一块平板和多接一根试管,划板、接种、转?/p>

均要严格按照无菌操作?/p>

 

4

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4

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 5000g

离心

5

分钟。用预冷的去离子水洗涤沉淀?/p>

4

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 5000g

离心

5

分钟?/p>

 

Note

:此步主要是为了洗去培养基中的盐?/p>

 

5

?/p>

沉淀加入

2ml

预冷?/p>

0.05mol/L CaCl

2

-15%

甘油混合溶液?/p>

轻吹散,

冰浴

5

分钟?/p>

4

?/p>

5000g

离心

5

分钟?/p>

 

6

、沉淀加入

2ml

预冷?/p>

0.05mol/L CaCl

2

-15%

甘油混合溶液,轻吹散,即成为感受态细?/p>

悬液。分装成

50~100

μ

l

的小份,贮存?/p>

-70

℃可保存半年?/p>

 

 

?/p>

15%

甘油?/p>

0.05mol/L CaCl

2

制备方法

: 

称取

0.28g 

CaCl

2

(

无水

,

分析?/p>

),

溶于

50ml

重蒸水中

,

加入

15ml

甘油

,

定容?/p>

100ml,

高压?/p>

菌?/p>

 

感受态细胞的特征

 

感受态:通过特殊处理使细胞处于能够吸收外?/p>

DNA

的状态。感受态细胞的特征?/p>

 

?/p>

1

)细胞表面暴露出一些可接受外来

DNA

的位点(以溶菌酶处理,可促使受体细胞的接

受位点充分暴露)

?/p>

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2

)细胞膜通透性增加(用钙离子处理,可使膜通透性增加,?/p>

DNA

直接穿过质膜进入细胞?/p>

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3

)受体细胞的修饰酶活性最高,而限制酶活性最低,使转入的

DNA

分子不易被切除或破坏?/p>

 



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