小肽含量的测定方?/p>
1.
试剂
标准蛋白溶液:准确称?/p>
0.4g
牛血清白蛋白,用蒸馏水溶解定容至
100mL
?/p>
贮存?/p>
4
℃冰箱?/p>
双缩脲试剂:称以
1.50g
硫酸?/p>
(CuSO
4
·
5H
2
O)
?/p>
6.0g
酒石酸钾?
(KNaC
4
H
4
O
6
·
4H
2
O)
,用
500mL
水溶解,在搅拌下加入
300mL
10%
NaOH
溶液?/p>
用水稀释到
1L
,贮存于塑料瓶中?/p>
10%
的三氯乙酸(
TCA
):准确称取
1.0
TCA
,用蒸馏水溶解定容至
10mL
?/p>
2.
小肽含量的测定步?/p>
2.1
样品前处?/p>
准确称取
1.0g
样品加入
9mL
水混匀,然后加?/p>
10mL 10%
?/p>
TCA
溶液?/p>
震荡混匀,静?/p>
30min
,最后离心,取上清液备用?/p>
2.2
标准曲线的制?/p>
试剂
1
2
3
4
5
6
蛋白标准溶液?/p>
mL
?/p>
0
1
2
3
4
5
蒸馏水(
mL
?/p>
5
4
3
2
1
0
双缩脲试剂(
mL
?/p>
5
5
5
5
5
5
按表
1.1
所示分别添加上述试剂,混匀,避光反?/p>
30min
,反应结束后?/p>
540nm
波长下测定吸光度值,以蛋白浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标作标准
曲线?/p>
2.3
样品测定
用移液枪准确移取
1mL
上清液于试管中,加入
4mL
蒸馏水,混匀?/p>
加入
5mL
双缩脲试剂,混匀,避光反?/p>
30min
,反应结束后?/p>
540nm
波长下测
定吸光度值将吸光度值代入标准曲线计算样品的小肽含量?/p>