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工具

 

1 

实验?/p>

  

人类染色体标本制备及核型分析

 

一?/p>

 

目的

 

1

?/p>

 

 

 

了解人类外周血淋巴细胞染色体玻片标本制备方法?/p>

 

2

?/p>

 

 

 

观察正常人体细胞染色体的形态、数目,掌握核型分析方法?/p>

 

二?/p>

 

试剂与器?/p>

 

1

?/p>

 

 

RPMI-1640

培养基?/p>

小牛血清?/p>

PHA

?/p>

5mg/ml

?/p>

?/p>

秋水仙素

?/p>

10

μ

g/ml

?/p>

?/p>

肝素

?/p>

600 

IU/ml

?/p>

?/p>

固定液(甲醇:冰醋酸?/p>

3

?/p>

1

?/p>

、低渗液?/p>

0.075mol/L

氯化钾)

?/p>

5%NaHCO

3

溶液、三蒸水?/p>

双抗

(

青、链霉素

)

?/p>

Giemsa

染液?/p>

1%

?/p>

?/p>

PH6.8

磷酸缓冲液?/p>

 

2

?/p>

  

超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、鼓风干燥机、离心机、冰箱、高压消毒锅?/p>

分析天平、注射器、培养瓶、离心管、滴管、滤器、滤膜、酒精灯、载玻片?/p>

 

3

?/p>

  

显微镜、人类染色体玻片标本、拭镜纸、二甲苯、香柏油、人类染色体放大照片、核

型纸、剪刀?/p>

 

三?/p>

 

内容

 

1

?/p>

  

观看电教:人体外周血培养及染色体标本的制备?/p>

 

2

?/p>

  

人体外周血淋巴细胞的培养及染色体玻片标本制作?/p>

 

3

?/p>

  

正常人体细胞染色体核型分析?/p>

 

人类染色标本的制?/p>

 

(

一

)  

实验原理

 

人体外周血淋巴细胞是保持了增殖潜能的暂不增殖细胞(

G

0

细胞?/p>

,一般可在血液中?/p>

环几年都不分裂。但在人工离体培养条件下,若在培养基中加?/p>

PHA

?/p>

phytohemagglutinin

?/p>

植物血细胞凝集素)

?/p>

PHA

可刺激

G

0

细胞转化为淋巴母细胞,重新获得增殖能力,并进行有

丝分裂。然后在培养基中加入适量秋水仙素?/p>

colchicne

?/p>

,使分裂细胞停滞于中期。用低渗

溶液处理?/p>

使分裂细胞膨胀。细胞悬液滴片后,通过加热使已膨胀的细胞爆裂,将染色体?/p>

散开来。最后用

Giemsa

染色,即可获得中期染色体标本?/p>

 

(

?/p>

)  

操作步骤

 

1

?/p>

 

 

培养液配?/p>

 

 

RPMI-1640

粉剂

10.4g

,碳酸氢?/p>

2.0g

,溶?/p>

1000ml

三蒸水中,过滤除

菌?/p>

 

2

?/p>

 

 

在无菌条件下,用量筒?/p>

 

RPMI-1640 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

80ml

 

灭活胎牛血?/p>

               20ml

 

青霉?/p>

                     100U/ml

 

链霉?/p>

                     100U/ml

 

将上述溶液混匀,用

5%

灭菌碳酸氢钠?/p>

1mol/L 

HCl

,调整培养液

PH

?/p>

7.2-7.4

,分?/p>

培养瓶,每瓶

5ml

,使用前,每瓶临时加

1%PHA0.5-2ml

,用注射?/p>

5

号针头滴?/p>

500

μ

g/ml

肝素,摇匀?/p>

 

3.  

培养

 

(1)  

采血和培?/p>

  

用灭菌注射器抽取

600

μ

g/ml

的肝?/p>

0.2ml

,润湿针筒,然后将多余的

肝素弃去。常规消毒被检者的肘部皮肤,从肘部静脉采血

1ml

,分装于培养液的培养瓶中?/p>

每瓶装入全血

10

?/p>

(7

号针?/p>

)

,摇匀,静置于

37

℃恒温培养箱中,培养

68 -72

小时?/p>

 

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实验?/p>

  

人类染色体标本制备及核型分析

 

一?/p>

 

目的

 

1

?/p>

 

 

 

了解人类外周血淋巴细胞染色体玻片标本制备方法?/p>

 

2

?/p>

 

 

 

观察正常人体细胞染色体的形态、数目,掌握核型分析方法?/p>

 

二?/p>

 

试剂与器?/p>

 

1

?/p>

 

 

RPMI-1640

培养基?/p>

小牛血清?/p>

PHA

?/p>

5mg/ml

?/p>

?/p>

秋水仙素

?/p>

10

μ

g/ml

?/p>

?/p>

肝素

?/p>

600 

IU/ml

?/p>

?/p>

固定液(甲醇:冰醋酸?/p>

3

?/p>

1

?/p>

、低渗液?/p>

0.075mol/L

氯化钾)

?/p>

5%NaHCO

3

溶液、三蒸水?/p>

双抗

(

青、链霉素

)

?/p>

Giemsa

染液?/p>

1%

?/p>

?/p>

PH6.8

磷酸缓冲液?/p>

 

2

?/p>

  

超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、鼓风干燥机、离心机、冰箱、高压消毒锅?/p>

分析天平、注射器、培养瓶、离心管、滴管、滤器、滤膜、酒精灯、载玻片?/p>

 

3

?/p>

  

显微镜、人类染色体玻片标本、拭镜纸、二甲苯、香柏油、人类染色体放大照片、核

型纸、剪刀?/p>

 

三?/p>

 

内容

 

1

?/p>

  

观看电教:人体外周血培养及染色体标本的制备?/p>

 

2

?/p>

  

人体外周血淋巴细胞的培养及染色体玻片标本制作?/p>

 

3

?/p>

  

正常人体细胞染色体核型分析?/p>

 

人类染色标本的制?/p>

 

(

一

)  

实验原理

 

人体外周血淋巴细胞是保持了增殖潜能的暂不增殖细胞(

G

0

细胞?/p>

,一般可在血液中?/p>

环几年都不分裂。但在人工离体培养条件下,若在培养基中加?/p>

PHA

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phytohemagglutinin

?/p>

植物血细胞凝集素)

?/p>

PHA

可刺激

G

0

细胞转化为淋巴母细胞,重新获得增殖能力,并进行有

丝分裂。然后在培养基中加入适量秋水仙素?/p>

colchicne

?/p>

,使分裂细胞停滞于中期。用低渗

溶液处理?/p>

使分裂细胞膨胀。细胞悬液滴片后,通过加热使已膨胀的细胞爆裂,将染色体?/p>

散开来。最后用

Giemsa

染色,即可获得中期染色体标本?/p>

 

(

?/p>

)  

操作步骤

 

1

?/p>

 

 

培养液配?/p>

 

 

RPMI-1640

粉剂

10.4g

,碳酸氢?/p>

2.0g

,溶?/p>

1000ml

三蒸水中,过滤除

菌?/p>

 

2

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在无菌条件下,用量筒?/p>

 

RPMI-1640 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

80ml

 

灭活胎牛血?/p>

               20ml

 

青霉?/p>

                     100U/ml

 

链霉?/p>

                     100U/ml

 

将上述溶液混匀,用

5%

灭菌碳酸氢钠?/p>

1mol/L 

HCl

,调整培养液

PH

?/p>

7.2-7.4

,分?/p>

培养瓶,每瓶

5ml

,使用前,每瓶临时加

1%PHA0.5-2ml

,用注射?/p>

5

号针头滴?/p>

500

μ

g/ml

肝素,摇匀?/p>

 

3.  

培养

 

(1)  

采血和培?/p>

  

用灭菌注射器抽取

600

μ

g/ml

的肝?/p>

0.2ml

,润湿针筒,然后将多余的

肝素弃去。常规消毒被检者的肘部皮肤,从肘部静脉采血

1ml

,分装于培养液的培养瓶中?/p>

每瓶装入全血

10

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(7

号针?/p>

)

,摇匀,静置于

37

℃恒温培养箱中,培养

68 -72

小时?/p>

 

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实验?/p>

  

人类染色体标本制备及核型分析

 

一?/p>

 

目的

 

1

?/p>

 

 

 

了解人类外周血淋巴细胞染色体玻片标本制备方法?/p>

 

2

?/p>

 

 

 

观察正常人体细胞染色体的形态、数目,掌握核型分析方法?/p>

 

二?/p>

 

试剂与器?/p>

 

1

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RPMI-1640

培养基?/p>

小牛血清?/p>

PHA

?/p>

5mg/ml

?/p>

?/p>

秋水仙素

?/p>

10

μ

g/ml

?/p>

?/p>

肝素

?/p>

600 

IU/ml

?/p>

?/p>

固定液(甲醇:冰醋酸?/p>

3

?/p>

1

?/p>

、低渗液?/p>

0.075mol/L

氯化钾)

?/p>

5%NaHCO

3

溶液、三蒸水?/p>

双抗

(

青、链霉素

)

?/p>

Giemsa

染液?/p>

1%

?/p>

?/p>

PH6.8

磷酸缓冲液?/p>

 

2

?/p>

  

超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、鼓风干燥机、离心机、冰箱、高压消毒锅?/p>

分析天平、注射器、培养瓶、离心管、滴管、滤器、滤膜、酒精灯、载玻片?/p>

 

3

?/p>

  

显微镜、人类染色体玻片标本、拭镜纸、二甲苯、香柏油、人类染色体放大照片、核

型纸、剪刀?/p>

 

三?/p>

 

内容

 

1

?/p>

  

观看电教:人体外周血培养及染色体标本的制备?/p>

 

2

?/p>

  

人体外周血淋巴细胞的培养及染色体玻片标本制作?/p>

 

3

?/p>

  

正常人体细胞染色体核型分析?/p>

 

人类染色标本的制?/p>

 

(

一

)  

实验原理

 

人体外周血淋巴细胞是保持了增殖潜能的暂不增殖细胞(

G

0

细胞?/p>

,一般可在血液中?/p>

环几年都不分裂。但在人工离体培养条件下,若在培养基中加?/p>

PHA

?/p>

phytohemagglutinin

?/p>

植物血细胞凝集素)

?/p>

PHA

可刺激

G

0

细胞转化为淋巴母细胞,重新获得增殖能力,并进行有

丝分裂。然后在培养基中加入适量秋水仙素?/p>

colchicne

?/p>

,使分裂细胞停滞于中期。用低渗

溶液处理?/p>

使分裂细胞膨胀。细胞悬液滴片后,通过加热使已膨胀的细胞爆裂,将染色体?/p>

散开来。最后用

Giemsa

染色,即可获得中期染色体标本?/p>

 

(

?/p>

)  

操作步骤

 

1

?/p>

 

 

培养液配?/p>

 

 

RPMI-1640

粉剂

10.4g

,碳酸氢?/p>

2.0g

,溶?/p>

1000ml

三蒸水中,过滤除

菌?/p>

 

2

?/p>

 

 

在无菌条件下,用量筒?/p>

 

RPMI-1640 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

80ml

 

灭活胎牛血?/p>

               20ml

 

青霉?/p>

                     100U/ml

 

链霉?/p>

                     100U/ml

 

将上述溶液混匀,用

5%

灭菌碳酸氢钠?/p>

1mol/L 

HCl

,调整培养液

PH

?/p>

7.2-7.4

,分?/p>

培养瓶,每瓶

5ml

,使用前,每瓶临时加

1%PHA0.5-2ml

,用注射?/p>

5

号针头滴?/p>

500

μ

g/ml

肝素,摇匀?/p>

 

3.  

培养

 

(1)  

采血和培?/p>

  

用灭菌注射器抽取

600

μ

g/ml

的肝?/p>

0.2ml

,润湿针筒,然后将多余的

肝素弃去。常规消毒被检者的肘部皮肤,从肘部静脉采血

1ml

,分装于培养液的培养瓶中?/p>

每瓶装入全血

10

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(7

号针?/p>

)

,摇匀,静置于

37

℃恒温培养箱中,培养

68 -72

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实验九十十一 - 百度文库
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人类染色体标本制备及核型分析

 

一?/p>

 

目的

 

1

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了解人类外周血淋巴细胞染色体玻片标本制备方法?/p>

 

2

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观察正常人体细胞染色体的形态、数目,掌握核型分析方法?/p>

 

二?/p>

 

试剂与器?/p>

 

1

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RPMI-1640

培养基?/p>

小牛血清?/p>

PHA

?/p>

5mg/ml

?/p>

?/p>

秋水仙素

?/p>

10

μ

g/ml

?/p>

?/p>

肝素

?/p>

600 

IU/ml

?/p>

?/p>

固定液(甲醇:冰醋酸?/p>

3

?/p>

1

?/p>

、低渗液?/p>

0.075mol/L

氯化钾)

?/p>

5%NaHCO

3

溶液、三蒸水?/p>

双抗

(

青、链霉素

)

?/p>

Giemsa

染液?/p>

1%

?/p>

?/p>

PH6.8

磷酸缓冲液?/p>

 

2

?/p>

  

超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、鼓风干燥机、离心机、冰箱、高压消毒锅?/p>

分析天平、注射器、培养瓶、离心管、滴管、滤器、滤膜、酒精灯、载玻片?/p>

 

3

?/p>

  

显微镜、人类染色体玻片标本、拭镜纸、二甲苯、香柏油、人类染色体放大照片、核

型纸、剪刀?/p>

 

三?/p>

 

内容

 

1

?/p>

  

观看电教:人体外周血培养及染色体标本的制备?/p>

 

2

?/p>

  

人体外周血淋巴细胞的培养及染色体玻片标本制作?/p>

 

3

?/p>

  

正常人体细胞染色体核型分析?/p>

 

人类染色标本的制?/p>

 

(

一

)  

实验原理

 

人体外周血淋巴细胞是保持了增殖潜能的暂不增殖细胞(

G

0

细胞?/p>

,一般可在血液中?/p>

环几年都不分裂。但在人工离体培养条件下,若在培养基中加?/p>

PHA

?/p>

phytohemagglutinin

?/p>

植物血细胞凝集素)

?/p>

PHA

可刺激

G

0

细胞转化为淋巴母细胞,重新获得增殖能力,并进行有

丝分裂。然后在培养基中加入适量秋水仙素?/p>

colchicne

?/p>

,使分裂细胞停滞于中期。用低渗

溶液处理?/p>

使分裂细胞膨胀。细胞悬液滴片后,通过加热使已膨胀的细胞爆裂,将染色体?/p>

散开来。最后用

Giemsa

染色,即可获得中期染色体标本?/p>

 

(

?/p>

)  

操作步骤

 

1

?/p>

 

 

培养液配?/p>

 

 

RPMI-1640

粉剂

10.4g

,碳酸氢?/p>

2.0g

,溶?/p>

1000ml

三蒸水中,过滤除

菌?/p>

 

2

?/p>

 

 

在无菌条件下,用量筒?/p>

 

RPMI-1640 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

80ml

 

灭活胎牛血?/p>

               20ml

 

青霉?/p>

                     100U/ml

 

链霉?/p>

                     100U/ml

 

将上述溶液混匀,用

5%

灭菌碳酸氢钠?/p>

1mol/L 

HCl

,调整培养液

PH

?/p>

7.2-7.4

,分?/p>

培养瓶,每瓶

5ml

,使用前,每瓶临时加

1%PHA0.5-2ml

,用注射?/p>

5

号针头滴?/p>

500

μ

g/ml

肝素,摇匀?/p>

 

3.  

培养

 

(1)  

采血和培?/p>

  

用灭菌注射器抽取

600

μ

g/ml

的肝?/p>

0.2ml

,润湿针筒,然后将多余的

肝素弃去。常规消毒被检者的肘部皮肤,从肘部静脉采血

1ml

,分装于培养液的培养瓶中?/p>

每瓶装入全血

10

?/p>

(7

号针?/p>

)

,摇匀,静置于

37

℃恒温培养箱中,培养

68 -72

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