实验一
淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆及其葡萄糖值的测定
一、实验原理及目的?/p>
淀粉可用酶法、酸法和酸酶法使淀粉水解成糊精、低聚糖和葡萄糖。淀粉糖浆或称液体葡萄糖?/p>
DE38-42
),主要
成分是葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖和糊精,是一种粘稠液体,甜味温和,极易为人体直接吸收,在饼干,糖果生产上
广为应用?/p>
双酶法水解淀粉制淀粉糖浆,是先以?/p>
-
淀粉酶使淀粉中的?/p>
-1
?/p>
4
糖苷键水解生成小分子糊精、低聚糖和少量葡
萄糖,然后再用糖化酶将糊精、低聚糖中的α
-1
?/p>
6
糖苷键和α
-1
?/p>
4
糖苷键切断,最后生成葡萄糖?/p>
淀粉糖浆的分析方法是根据国家标?/p>
GB12099-89
,采用菲林滴定法测定淀粉水解产品的葡萄糖值(
DE
),例如
DE
值为
42
,表示淀粉糖浆中?/p>
42%
的葡萄糖?/p>
本实验的目的?/p>
?/p>
1
)通过实验,了解淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆的基本原理?/p>
?/p>
2
)掌握淀粉双酶法制备淀粉糖浆的实验方法,以及酶的使用?/p>
?/p>
3
)熟悉淀粉水解产品的葡萄糖值测定方法?/p>
二、实验材料、试剂与仪器
材料:马铃薯淀粉?/p>
试剂:液化型α
-
淀粉酶(酶活力
6000
单位
/g
),糖化酶(酶活力为
4-5
万单?/p>
/g
),菲林溶液
A
?/p>
B
,亚甲基?
指示剂,
D-
葡萄糖标准溶液?/p>
?/p>
1
)碱性酒石酸铜甲液:称取
15g
硫酸?/p>
(CuS0
4
·
5H
2
O)
?/p>
0.05g
亚甲基蓝,溶于水中并稀释至
1000ml
?/p>
?/p>
2
)碱性酒石酸铜乙液:称取
50g
酒石酸钾钠及
75g
氢氧化钠,溶于水中,再加?/p>
4g
亚铁氰化钾,完全溶解后,
用水稀释至
1000ml
,贮存于橡胶塞玻璃瓶内?/p>
?/p>
5
)葡萄糖标准溶液:精密称?/p>
l.000g
经过
98~100
℃干燥至恒量的纯葡萄糖,加水溶解后加?/p>
5ml
盐酸,并?
水稀释至
1000ml
。此溶液每毫升相当于
1mg
葡萄糖?/p>
仪器?/p>
150ml
锥形瓶,容量瓶(
25ml
),移液管(
1ml, 5ml, 20ml
),
100ml
量筒,搅拌棒,恒温水浴锅,水浴摇
床,离心机,电炉子?/p>
三、实验步?/p>
(一)淀粉糖浆的制备
2 g
淀粉置?/p>
150ml
锥形瓶中,加?/p>
50ml
,搅拌均匀,配成淀粉浆,于
95
℃水浴上加热,并不断搅拌,使淀粉浆
由开始糊化直到完全成糊,呈透明状。冷却淀粉糊?/p>
80
℃以下,?/p>
2%
?/p>
HCl
?/p>
pH
?/p>
5.5-7.5
之间,添?/p>
0.2mlCaCl
2
作为酶的激活剂,加入液化型α
-
淀粉酶
2mg(
先溶?/p>
5ml
蒸馏水中,再倒入糊化的淀粉中
),
使温度保持在
80
℃(水浴
摇床),搅拌
20
分钟使其液化。将锥形瓶移至电炉(隔石棉网)加热到至沸,翻腾灭?/p>
2
分钟?/p>
4000
rpm
离心
5
min
?/p>
将上层清液冷却至
55
℃,
?/p>
pH
?/p>
4.5
左右?/p>
加入
0.5ml
糖化酶于
65
℃恒温水浴中糖化
40min
?/p>
反应完成后电炉加热至
沸,翻腾灭酶
2min
,即为淀粉糖浆。再?/p>
2ml,
定容?/p>
25ml
,作为样品液待用?/p>
(二?/p>
DE
值的测定