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MTT

原理、步骤、结果分析方法及注意事项

 

一?/p>

MTT

原理

 

MTT

全称?/p>

3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-2)-3,5-diphenytetrazoliumromide

?/p>

汉语

化学名为

 

3-(4

?/p>

5-

二甲基噻?/p>

-2)-2

?/p>

5-

二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是

一种黄颜色的染料?/p>

MTT

比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检?/p>

原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源?/p>

MTT

还原为水不溶性的蓝紫

色结晶甲瓒(

Formazan

)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜

?/p>

DMSO

)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪?/p>

490 nm

波长处测定其?/p>

吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,

MTT

结晶形成的量?/p>

细胞数成正比?/p>

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测?/p>

大规模的抗肿

瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高?/p>

经济。缺点:由于

MTT

经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,须被溶解后才能检

测?/p>

这不仅使工作量增加,

也会对实验结果的准确性产生影响,

而且溶解甲的?/p>

机溶剂对实验者也有损害?/p>

 

二?/p>

MTT

溶液的配制方?/p>

 

通常,此法中?/p>

MTT

浓度?/p>

5 mg/mL

。因此,可以称取

MTT 0.5 g

,溶?/p>

100 mL

的磷酸缓冲液?/p>

PBS

?/p>

或无酚红的培养基中,?/p>

0.22 

μm

滤膜过滤以除?/p>

溶液里的细菌,放

4

℃避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔

纸包住?/p>

实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,

觉得这样比较好?/p>

需

要注意的是,

MTT

法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝

对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,

MTT

吸光度最

好在

0-0.7

范围内?/p>

 

MTT

一般最好现用现配,过滤?/p>

4º

C

避光保存两周内有效,或配制成

5 

mg/mL

保存?/p>

-20º

C

长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或?/p>

黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都?/p>

MTT

粉分装在

EP

管里,用的时

候现配,直接往细胞培养板中加,没必要一下子配置那么多液体,尤其?/p>

MTT

变为灰绿色时就绝对不能再用了?/p>

 

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原理、步骤、结果分析方法及注意事项

 

一?/p>

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原理

 

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全称?/p>

3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-2)-3,5-diphenytetrazoliumromide

?/p>

汉语

化学名为

 

3-(4

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5-

二甲基噻?/p>

-2)-2

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5-

二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是

一种黄颜色的染料?/p>

MTT

比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检?/p>

原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源?/p>

MTT

还原为水不溶性的蓝紫

色结晶甲瓒(

Formazan

)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜

?/p>

DMSO

)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪?/p>

490 nm

波长处测定其?/p>

吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,

MTT

结晶形成的量?/p>

细胞数成正比?/p>

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测?/p>

大规模的抗肿

瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高?/p>

经济。缺点:由于

MTT

经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,须被溶解后才能检

测?/p>

这不仅使工作量增加,

也会对实验结果的准确性产生影响,

而且溶解甲的?/p>

机溶剂对实验者也有损害?/p>

 

二?/p>

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溶液的配制方?/p>

 

通常,此法中?/p>

MTT

浓度?/p>

5 mg/mL

。因此,可以称取

MTT 0.5 g

,溶?/p>

100 mL

的磷酸缓冲液?/p>

PBS

?/p>

或无酚红的培养基中,?/p>

0.22 

μm

滤膜过滤以除?/p>

溶液里的细菌,放

4

℃避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔

纸包住?/p>

实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,

觉得这样比较好?/p>

需

要注意的是,

MTT

法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝

对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,

MTT

吸光度最

好在

0-0.7

范围内?/p>

 

MTT

一般最好现用现配,过滤?/p>

4º

C

避光保存两周内有效,或配制成

5 

mg/mL

保存?/p>

-20º

C

长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或?/p>

黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都?/p>

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管里,用的时

候现配,直接往细胞培养板中加,没必要一下子配置那么多液体,尤其?/p>

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变为灰绿色时就绝对不能再用了?/p>

 

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原理

 

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全称?/p>

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化学名为

 

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二甲基噻?/p>

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二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是

一种黄颜色的染料?/p>

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比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检?/p>

原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源?/p>

MTT

还原为水不溶性的蓝紫

色结晶甲瓒(

Formazan

)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜

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)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪?/p>

490 nm

波长处测定其?/p>

吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,

MTT

结晶形成的量?/p>

细胞数成正比?/p>

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测?/p>

大规模的抗肿

瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高?/p>

经济。缺点:由于

MTT

经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,须被溶解后才能检

测?/p>

这不仅使工作量增加,

也会对实验结果的准确性产生影响,

而且溶解甲的?/p>

机溶剂对实验者也有损害?/p>

 

二?/p>

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溶液的配制方?/p>

 

通常,此法中?/p>

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浓度?/p>

5 mg/mL

。因此,可以称取

MTT 0.5 g

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100 mL

的磷酸缓冲液?/p>

PBS

?/p>

或无酚红的培养基中,?/p>

0.22 

μm

滤膜过滤以除?/p>

溶液里的细菌,放

4

℃避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔

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实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,

觉得这样比较好?/p>

需

要注意的是,

MTT

法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝

对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,

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吸光度最

好在

0-0.7

范围内?/p>

 

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一般最好现用现配,过滤?/p>

4º

C

避光保存两周内有效,或配制成

5 

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-20º

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长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或?/p>

黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都?/p>

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粉分装在

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变为灰绿色时就绝对不能再用了?/p>

 

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MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项 - 百度文库
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原理、步骤、结果分析方法及注意事项

 

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原理

 

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全称?/p>

3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-2)-3,5-diphenytetrazoliumromide

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化学名为

 

3-(4

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5-

二甲基噻?/p>

-2)-2

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二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是

一种黄颜色的染料?/p>

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比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检?/p>

原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源?/p>

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还原为水不溶性的蓝紫

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)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜

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)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪?/p>

490 nm

波长处测定其?/p>

吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,

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结晶形成的量?/p>

细胞数成正比?/p>

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测?/p>

大规模的抗肿

瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高?/p>

经济。缺点:由于

MTT

经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,须被溶解后才能检

测?/p>

这不仅使工作量增加,

也会对实验结果的准确性产生影响,

而且溶解甲的?/p>

机溶剂对实验者也有损害?/p>

 

二?/p>

MTT

溶液的配制方?/p>

 

通常,此法中?/p>

MTT

浓度?/p>

5 mg/mL

。因此,可以称取

MTT 0.5 g

,溶?/p>

100 mL

的磷酸缓冲液?/p>

PBS

?/p>

或无酚红的培养基中,?/p>

0.22 

μm

滤膜过滤以除?/p>

溶液里的细菌,放

4

℃避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔

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实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,

觉得这样比较好?/p>

需

要注意的是,

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法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝

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吸光度最

好在

0-0.7

范围内?/p>

 

MTT

一般最好现用现配,过滤?/p>

4º

C

避光保存两周内有效,或配制成

5 

mg/mL

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-20º

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长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或?/p>

黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都?/p>

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