姓名吴月婷学?/p>
13990115
班级序号
6
实验日期
2015-11-10
室温
18
?/p>
实验
8
细菌的生理生化鉴?/p>
1
实验目的
1)
了解微生物对大分子物质水解的原理和方法,了解糖发酵及
IMViC
的原理和方法?/p>
2)
鉴定未知菌对淀粉、明胶的水解能力?/p>
3)
鉴定未知菌糖发酵试验?/p>
IMViC
试验中的能力?/p>
2
实验原理
1)
大分子物质的水解试验
微生物不能直接利用大分子的淀粉?/p>
蛋白质和脂肪?/p>
必须靠产生的胞外酶将大分子物?/p>
分解才能被微生物吸收利用?/p>
胞外酶主要为水解酶,
通过加水裂解大的物质为较小的?/p>
合物?/p>
使其能被运输至细胞内?/p>
如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖?/p>
脂肪
酶水解脂肪为甘油和脂肪酸?/p>
蛋白酶水解蛋白为氨基酸等?/p>
淀粉遇碘液会产生蓝色,
?/p>
细菌水解淀粉的区域?/p>
用碘测定不再产生蓝色?/p>
表明细菌产生淀粉酶?/p>
明胶是由胶原?/p>
白经水解产生的蛋白质,在
25
°
C
以下维持凝胶状态,呈固体形式存在,?/p>
25
°
C
?/p>
上明胶会液化?/p>
有些微生物能产生明胶酶,
水解明胶而使之液化?/p>
石蕊在酸性条件下?/p>
粉红色,在碱性条件下紫色,被还原时为无色?/p>
2)
糖发酵试?/p>
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,
在肠道细菌的鉴定上尤为重要?/p>
绝大多数
细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异?/p>
有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷?/p>
二氧化碳等)
;有些细菌只产酸不产气。大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖并产气。当发酵
产酸时,溴甲酚紫指示剂可由紫色(
pH6.8
)变为黄色(
pH5.2
?/p>
。气体的产生可由倒置
的德汉氏小管中有无气泡来证明?/p>
3)
IMViC
试验
吲哚试验是用来检测吲哚的产生?/p>
有些细菌能产生色氨酸酶,
分解蛋白胨中的色?/p>
酸产生吲哚和丙酮酸?/p>
吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合,
形成红色的玫瑰吲哚?/p>
大肠杆菌
吲哚试验为阳性?/p>
甲基红试验是用来检测葡萄糖产生的有机酸?/p>
如甲酸、乙酸?/p>
乳酸等。当细菌代谢
糖产生酸时,培养基就会变酸,使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色(
pH6.3
)变?/p>
红色?/p>
pH4.2
?/p>
,即甲基红反应。大肠杆菌为阳性?/p>
V-P
试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力,如?/p>
酮酸进行缩合?/p>
脱羧生成乙酰甲基甲醇?/p>
此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化
成二乙酰?/p>
二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用?/p>
生成红色化合物,
即伏
-
普反应阳性;
不产生红色化合物者为阴性反应。大肠杆菌为阴性?/p>
柠檬酸盐试验是用来检测细菌利用柠檬酸的能力?/p>
有些细菌能分解柠檬酸形成
CO2
?/p>
由于培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠?/p>
?/p>
pH
升高?/p>
加入
1%
麝香草酚蓝指示剂时,
培养基由绿色变为深蓝色。大肠杆菌为阴性?/p>
3
步骤
1)
大分子物质的水解试验
?/p>
淀粉水解试?/p>