Trizol
法使用步?/p>
一、分离纯化的基本原理
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化
RNA
?/p>
RNA
质量的高
低常常影?/p>
cDNA
库,
RT-PCR
?/p>
Northern
Blot
等分子生物学实验的成败?/p>
Trizol
是一
种新型?/p>
RNA
抽提试剂?/p>
内含异硫氰酸胍等物质?/p>
能迅速破碎细胞,
抑制细胞释放?/p>
的核酸酶?/p>
二、用户需自备的试剂和材料
无水乙醇?/p>
氯仿?/p>
Glycogen
(可能需要)
?/p>
1.5ml
Eppendorf
?/p>
?/p>
RNase-free
?/p>
?/p>
Tips
?/p>
RNase-free
?/p>
三、准备工?/p>
RNase
酶非常稳定,是导?/p>
RNA
降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以?/p>
时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白?/p>
制剂都不能是
RNase
完全失活。它广泛存在于人的皮肤上,因此,在与
RNA
制备有关
的分子生物学实验时,必须戴手套?/p>
RNase
的又一污染源是取液器,
根据取液器制造商的要求对取液器进行处理?/p>
一般情
况下采用?/p>
DEPC
(
焦炭酸二磷脂,一?/p>
RNase
抑制?/p>
)
配制?/p>
70%
乙醇擦洗取液器的?/p>
部和外部,基本达到要求。取
RNase-free
的物品时必须戴手套?/p>
1
?/p>
料制品的处理
尽可能使用无菌,一次性塑料制品,已标?/p>
RNase-Free
的塑料制品,如没有开
封使用过通常没有必要再次处理?/p>
对于国产塑料制品?/p>
原则上都必须处理方可使用?/p>
处理步骤如下?/p>
1
?/p>
在玻璃烧杯中注入去离子水?/p>
加入
DEPC
?/p>
DEPC
的终浓度?/p>
0.1%
。注意:
DEPC
为剧
毒物,活性很强,小心在通风柜中使用?/p>
2
?/p>
处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,
注入
DEPC
水溶液,
使塑料制?