微生物鉴定的生理生化反应
各种细菌具有各自独特的酶系统?/p>
因而对底物的分解能力不同,
其代谢产物也不同?/p>
用生?/p>
化学方法测定这些代谢产物?/p>
可用来区别和鉴定细菌的种类?/p>
利用生物化学方法来鉴别不?/p>
细菌?/p>
称为细菌的生物化学试验或称生化反应?/p>
生物化学试验的方法很多,
主要有以下几类?/p>
一、碳水化合物的代谢试?/p>
1
.糖(醇、苷)类发酵试验
?/p>
1
)原理:不同种类细菌含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶,因而对各种糖(醇、苷?/p>
类的代谢能力也有所不同,即使能分解某种糖(醇、苷)类,其代谢产物可因菌种而异。检
查细菌对培养基中所含糖(醇、苷)降解后产酸或产酸产气的能力,可用以鉴定细菌种类?/p>
(2)
方法:在基础培养基中(如酚红肉汤基础培养?/p>
pH7.4
)加?/p>
0.5~1.0
%(
w/v
)的?/p>
定糖(醇、苷)类。所使用的糖(醇、苷)类有很多种,根据不同需要可选择单糖、多糖或
低聚糖?/p>
多元醇和环醇等,
见表
6-4-1
?/p>
将待鉴定的纯培养细菌接种入试验培养基中,
?/p>
35
?/p>
孵育箱内孵育数小时到两周(视方法及菌种而定)后,观察结果。若用微量发酵管,或要求
培养时间较长时,应注意保持其周围的湿度,以免培养基干燥?/p>
(3)
结果:能分解糖(醇、苷)产酸的细菌,培养基中的指示剂呈酸性反应(如酚红变
为黄色)
,产气的细菌可在小倒管?/p>
Durham
小管)中产生气泡,固体培养基则产生裂隙。不
分解糖则无变化?/p>
(4)
应用:糖(醇、苷)类发酵试验,是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验,?/p>
同细菌可发酵
不同的糖(醇、苷)类,如沙门菌可发酵葡萄糖,但不能发酵乳糖,大肠?/p>
希菌则可发酵葡萄糖和乳糖?/p>
即便是两种细菌均可发酵同一种糖类,
其发酵结果也不尽相同?/p>
如志贺菌和大肠埃希菌均可发酵葡萄糖,
但前者仅产酸?/p>
而后者则产酸、产气,故可利用?/p>
试验鉴别细菌?/p>
?/p>
6-4-1
常用于细菌糖发酵试验的糖、醇?/p>
单糖
四碳糖:赤藓?/p>
,
五碳糖:核糖
核酮?/p>
木糖
阿拉伯糖
,
六碳糖:葡萄?/p>
?/p>
?/p>
半乳?/p>
甘露?/p>
双糖
蔗糖(葡萄糖+果糖)
乳糖(葡萄糖+半乳糖?/p>
麦芽糖(两分子葡萄糖?/p>
三糖
棉子糖(葡萄糖+果糖+半乳糖?/p>
多糖
菊糖(多分子果糖?/p>
淀?/p>
醇类
侧金盏花?/p>
卫茅?/p>
甘露?/p>
山梨?/p>
非糖?/p>
肌醇
2
.葡萄糖代谢类型鉴别试验
(1)
原理:细菌在分解葡萄糖的过程中,必须有分子氧参加的,称为氧化型;能进行无氧降
解的为发酵型?/p>
不分解葡萄糖的细菌为产碱型?/p>
发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能?/p>
解葡萄糖,而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵?/p>
O/F
?/p>
Hugh
?/p>
Leifson
?/p>
HL
)试验,可用于区别细菌的代谢类型?/p>
(2)
方法?/p>
挑取少许纯培养物(不要从选择性平板中挑取?/p>
接种
2
?/p>
HL
培养管中?/p>
在其中一
管加入高度至少为
0.5cm
的无菌液体石蜡以隔绝空气(作为密封管?/p>
,另一管不加(作为开
放管?/p>
。置
35
℃孵箱孵?/p>
48h
以上?/p>
?/p>
(3)
结果?/p>
两管培养基均不产酸(颜色不变)为阴性;两管都产酸(变黄)为发酵型;?/p>
液体石蜡管不产酸,不加液体石蜡管产酸为氧化型?/p>