Western blot
鎿嶄綔娴佺▼
1
銆佸彇涓�鐢熼暱鐘舵�佽壇濂界殑鍩瑰吇鐨匡紙
10cm
锛?/p>
锛岃儼閰舵秷鍖栦紶浠ｏ紝浠?/p>
1
锛?/p>
4
浼犱唬
2
銆佸煿鍏?/p>
24
鍚庢崲娑诧紙鎴栫浜屽ぉ鏇存崲鍩瑰吇娑诧級
3
銆佽瀵熺粏鑳炵殑鐢熼暱鐘舵�侊紝鍙栧湪瀵规暟鐢熼暱鏈熺粏鑳烇紝鍗犳弧
70%-80%
鐨?/p>
4
銆佺敤
PBS
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5
銆佸姞鍏?/p>
BBR
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H2O2
鑷村噵浜″鐞?/p>
6
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4
灏忔椂鍚庯紝鐢ㄤ笉鍚?/p>
EDTA
鐨勮儼閰舵秷鍖栨敹闆嗙粏鑳?/p>
7
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PBS
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2
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1200rpm
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5-8min
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8
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-80
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鐨垮彿
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1#
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2#
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H2O2
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3#
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1
渭
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4#
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5
渭
M/L BBR
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5#
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10
渭
M/L BBR
鑽墿骞查鎶楀噵浜＄殑浣滅敤
6#
鑽墿娌荤枟缁?/p>
20
渭
M/L BBR
鑽墿骞查鎶楀噵浜＄殑浣滅敤
娉細鎻愬墠鍗婂皬鏃跺姞鍏?/p>
BBR
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H2O2
浣滅敤
4
灏忔椂
10cm
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200uM H2O2
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缁堟祿搴?/p>
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X
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H2O2
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1#
0
渭
M/L
0
渭
L
10mL
0
渭
L
0
渭
L
2#
0
渭
M/L
0
渭
L
9ml+938.7
渭
L
61.3
渭
L
61.3
渭
L
3#
1
渭
M/L
20
渭
L
9ml+918.7
渭
L
61.3
渭
L
81.3
渭
L
4#
5
渭
M/L
100
渭
L
9ml+838.7
渭
L
61.3
渭
L
161.3
渭
L
5#
10
渭
M/L
200
渭
L
9ml+738.7
渭
L
61.3
渭
L
261.3
渭
L
6#
20
渭
M/L
400
渭
L
9ml+538.7
渭
L
61.3
渭
L
461.3
渭
L
闄勶細
BBR
璁＄畻鍏紡锛?/p>
500
渭
M/L*X
渭
L=10
渭
M/L*10000
渭
L
X=200
渭
L
鏂瑰紡锛?/p>
10
渭
L
姣嶆恫锛屾憾浜?/p>
( 2 )mL PBS
涓?/p>
鍗冲緱浣跨敤婧跺害
BBR 500
渭
M/L
H2O2
璁＄畻鍏紡锛?/p>
200
渭
M/L *10000
渭
L=
蟻
V/34*10
-3
moL
蟻
=1.11g/ml
V=68000/
蟻
*10
-3
锛?/p>
渭
L
锛?/p>
V
鈥?/p>
=68/
蟻
锛?/p>
渭
L
锛?/p>
=61.3
锛?/p>
渭
L
锛?/p>
鏂瑰紡锛氬彇
10
渭
L30%
鍙屾哀姘存憾浜?/p>
10ml
鐏弻鍘荤瀛愮函姘达紝绋�閲?/p>
1000
鍊?/p>
10cm
鍩瑰吇鐨?/p>
400uM H2O2
鐨垮彿
Y(
缁堟祿搴?/p>
)
X
锛堝彇娑查噺锛?/p>
DMEM
H2O2
闇�瑕佹娊鍙栧煿鍏绘恫
1#
0
渭
M/L
0
渭
L
10mL
0
渭
L
0
渭
L
2#
0
渭
M/L
0
渭
L
9ml+938.7
渭
L
122.6
渭
L
122.6
渭
L
3#
1
渭
M/L
20
渭
L
9ml+918.7
渭
L
122.6
渭
L
142.6
渭
L
4#
5
渭
M/L
100
渭
L
9ml+838.7
渭
L
122.6
渭
L
222.6
渭
L
5#
10
渭
M/L
200
渭
L
9ml+738.7
渭
L
122.6
渭
L
322.6
渭
L
6#
20
渭
M/L
400
渭
L
9ml+538.7
渭
L
122.6
渭
L
522.6
渭
L