细胞计数实验报告
一、目?/p>
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞
计数
二、原?/p>
细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同?/p>
显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体?/p>
孢子悬液注入血球计数板的计数室中,于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的
方法。因为计数板是一块特别的载玻片。其上由四条槽构成三个平台;中间较宽的平?/p>
又被一短横槽隔成两半,
每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分为九个大
方格,一个大方格分成
16
个中方格,每个中方格又分?/p>
25
个小方格,无论哪种每个大
方格中的小方格都?/p>
400
个?/p>
每一个大方格边长?/p>
0
?/p>
1mm
?/p>
所以计数室的容积为
0
?/p>
1mm3
?/p>
计数时,通常只用
4
个四周大方格内的细胞数即可。然后求出每个大方格的平均值,?/p>
得出一个大方格中的平均细胞数,
再换算成
lml
菌液中的总细胞数。若设大方格中平?/p>
细胞数为
N
,菌液稀释倍数?/p>
M
,则计算方法为:
lml
菌液中的总菌?/p>
=
平均每个中格中菌的个?/p>
=10000xMxN=10000MN(
?/p>
)
三?/p>
实验材料
普通显微镜、血球计数板、试管、吸管,微量移液管、细胞悬浮液
四、实验步?/p>
1
、将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上?/p>
2
、将细胞悬液吸出少许,注射在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间?/p>
3
、镜下观察,计算计数板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然?/p>
按下式计算:
细胞?/p>
/ml
?/p>
4
大格细胞总数/ 4×10000
注意?/p>
镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,
应按单个细胞计算?/p>
若细胞团?/p>
10%
以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液
五、实验结?/p>
六、讨论与反?/p>
注意多计数几次,求平均?/p>
细胞要比较均匀的分布,
四个大方格上的细胞数不应相差太多?/p>
否则重新混匀
细胞悬浮液,再次计数