《动物细胞培养技术》复习思考题
1.
动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高?你认为该如何保证器皿中无杂质?如?
器皿中有杂质,会对细胞培养产生什么样的影响?
答:
①离体细胞对各种毒物都很敏感?/p>
若所用器材清洗效果未达到要求?/p>
各种毒物会损坏细
胞影响实验?/p>
②器皿使用高压灭菌锅?/p>
121.3
℃,
20~30
分钟?/p>
在取拿的时候用经过高压灭菌
后的镊子取拿,避免造成污染。③
2.
叙述超净工作台的工作原理?/p>
答:
超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程,
在这个过程中风机起到了心脏的作用?/p>
?/p>
风机驱动空气通过高效过滤器得以净化,净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃?/p>
细菌甚至病毒颗粒带走,使工作区构成无菌环境?/p>
3.
正压过滤器为何会除菌?/p>
答:正压式过滤器没有内置灭菌灯,正压式过滤器利用的是两层
0.22um
孔的过滤膜,这层
膜可以将细菌阻挡在膜上,过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过?/p>
4.
各种细胞培养用液的配制需要很精确吗?如果不精确,会导致什么后果?请举例说明?
你认为精确配制各种溶液?
答:
5.
配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体?/p>
pH
发生了什么变化?
答:配制后的液体应呈桃红色,
PH
值为
7.4
左右。苯酚红的变色域?/p>
1.2
(橙?/p>
~3.0
(黄),
6.5
(棕色)
~8.0
(紫色),若为黄色,则液体呈酸性,不利于细胞的生存?/p>
6.
用于分离细胞的消化液为什么宜用无
Ca
?/p>
Mg
离子?/p>
D-Hanks
液或
PBS
液配?/p>
答:
Ca
?/p>
2
?/p>
Mg
?/p>
2
是细胞膜的重要组分,具有使细胞凝聚的作用。因此,用于分离细胞?/p>
消化液宜用无
Ca
?/p>
2
?/p>
Mg
?/p>
2
离子?/p>
D-Hanks
液或
PBS
液?/p>
7.
L-
谷氨酰胺在营养液中有何作用?
答:
L
-谷氨酰胺是细胞的能量来源;是一种必须氨基酸,是使物体合成核酸、蛋白质?/p>
嘌呤?/p>
嘧啶的重要前体,
也是蛋白质合成分解的调节物;
是细胞内氨的清除剂,氨对一些细
胞有毒性?/p>
8.
HEPES
溶液的作用机理?
答:它是一种氢离子缓冲剂。主要作用是防止培养?/p>
pH
迅速变?/p>
9.
平衡盐溶液的组成与基本作用?小牛血清在细胞培养中有哪些作用?/p>
答:①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成
,
它的作用是维持细胞渗透压平衡
,
保持
pH
稳定及提供简单的营养
.
主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。②
作用?/p>
a
提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物,以及?/p>
些低分子营养物质?/p>
b
提供结合蛋白,识别维生素、脂类、金属离子,并与有毒金属和热?/p>
物质结合?/p>
起解毒作用;
c
是细胞贴壁?/p>
铺展生长所需因子的来源;
d
起酸碱度缓冲液作用;
e
提供蛋白酶抑制剂,细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受损伤?/p>
10.
营养液制备后为什么要小剂量分装?
答:避免营养液被污染后,全部的营养液都被污染?/p>
营养液一次用完过后,下一次的实验就不能用,会引起污染,影响实验,若冷冻营养液,则
营养液的营养成分会有所损失,影响细胞的生长
11.
10
?/p>
U/mL
单位青霉素、链霉素的配制方法?
答:用注射器?/p>
10
毫升双蒸水溶?/p>
100
万单位的链霉素,弃去
2ml
,用剩余?/p>
8ml
链霉?/p>
溶解
80
万单位的青霉素,配制成每毫升青霉素、链霉素?/p>
10
万单位的母液?/p>
12.
细胞培养过程中对无菌的要求很高,
你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污