Trizol
法使用步?/p>
一、分离纯化的基本原理
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化
RNA
?/p>
RNA
质量的高低常常影?/p>
cDNA
库,
RT-PCR
?/p>
Northern
Blot
等分子生物学
实验的成败?/p>
Trizol
是一种新型?/p>
RNA
抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物
质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶?/p>
二、用户需自备的试剂和材料
无水乙醇、氯仿?/p>
Glycogen
(可能需要)?/p>
1.5ml Eppendorf
?/p>
?/p>
RNase-free
)?/p>
Tips
?/p>
RNase-free
?/p>
三、准备工?/p>
RNase
酶非常稳定,是导?/p>
RNA
降解最主要的物质。它在一些极端的
条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高?/p>
蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是
RNase
完全失活。它广泛存在于人
的皮肤上,因此,在与
RNA
制备有关的分子生物学实验时,必须戴手套?/p>
RNase
的又一污染源是取液器,根据取液器制造商的要求对取液器进?/p>
处理?/p>
一般情况下采用?/p>
DEPC
配制?/p>
70%
乙醇擦洗取液器的内部和外部,
基本达到要求。取
RNase-free
的物品时必须戴手套?/p>
1
?/p>
料制品的处理
尽可能使用无菌,
一次性塑料制品,
已标?/p>
RNase-Free
的塑料制品,
如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则?/p>
都必须处理方可使用。处理步骤如下:
1
)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入
DEPC
?/p>
DEPC
的终浓度?/p>
0.1%
。注
意:
DEPC
为剧毒物,活性很强,小心在通风柜中使用?/p>
2
)处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入
DEPC
水溶液,
使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中?/p>
3
)在通风柜中室温处理过夜?/p>
4
)将
DEPC
水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已
DEPC
水处理过?/p>
塑料制品的烧杯,高温高压蒸气灭菌至少
30
分钟?/p>
5
)烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用?/p>
2
?/p>
璃玻和金属物?/p>