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Trizol

法使用步?/p>

  

一、分离纯化的基本原理

  

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化

RNA

?/p>

RNA

质量的高低常常影?/p>

cDNA

库,

RT-PCR

?/p>

Northern 

Blot

等分子生物学

实验的成败?/p>

Trizol

是一种新型?/p>

RNA

抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物

质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶?/p>

  

 

二、用户需自备的试剂和材料

  

无水乙醇、氯仿?/p>

Glycogen

(可能需要)?/p>

 1.5ml Eppendorf

?/p>

?/p>

RNase-free

)?/p>

 Tips

?/p>

RNase-free

?/p>

  

 

三、准备工?/p>

  

RNase

酶非常稳定,是导?/p>

RNA

降解最主要的物质。它在一些极端的

条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高?/p>

蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是

RNase

完全失活。它广泛存在于人

的皮肤上,因此,在与

RNA

制备有关的分子生物学实验时,必须戴手套?/p>

  

RNase

的又一污染源是取液器,根据取液器制造商的要求对取液器进?/p>

处理?/p>

一般情况下采用?/p>

DEPC

配制?/p>

70%

乙醇擦洗取液器的内部和外部,

基本达到要求。取

RNase-free

的物品时必须戴手套?/p>

  

 

1

?/p>

 

料制品的处理

  

 

尽可能使用无菌,

一次性塑料制品,

已标?/p>

RNase-Free 

的塑料制品,

如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则?/p>

都必须处理方可使用。处理步骤如下:

  

 

1

)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入

DEPC

?/p>

DEPC

的终浓度?/p>

0.1%

。注

意:

DEPC

为剧毒物,活性很强,小心在通风柜中使用?/p>

  

2

)处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入

DEPC

水溶液,

使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中?/p>

  

3

)在通风柜中室温处理过夜?/p>

  

4

)将

DEPC

水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已

DEPC

水处理过?/p>

塑料制品的烧杯,高温高压蒸气灭菌至少

30

分钟?/p>

  

5

)烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用?/p>

  

 

2

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璃玻和金属物?/p>

  

 

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一、分离纯化的基本原理

  

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化

RNA

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RNA

质量的高低常常影?/p>

cDNA

库,

RT-PCR

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等分子生物学

实验的成败?/p>

Trizol

是一种新型?/p>

RNA

抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物

质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶?/p>

  

 

二、用户需自备的试剂和材料

  

无水乙醇、氯仿?/p>

Glycogen

(可能需要)?/p>

 1.5ml Eppendorf

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三、准备工?/p>

  

RNase

酶非常稳定,是导?/p>

RNA

降解最主要的物质。它在一些极端的

条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高?/p>

蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是

RNase

完全失活。它广泛存在于人

的皮肤上,因此,在与

RNA

制备有关的分子生物学实验时,必须戴手套?/p>

  

RNase

的又一污染源是取液器,根据取液器制造商的要求对取液器进?/p>

处理?/p>

一般情况下采用?/p>

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配制?/p>

70%

乙醇擦洗取液器的内部和外部,

基本达到要求。取

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的物品时必须戴手套?/p>

  

 

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料制品的处理

  

 

尽可能使用无菌,

一次性塑料制品,

已标?/p>

RNase-Free 

的塑料制品,

如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则?/p>

都必须处理方可使用。处理步骤如下:

  

 

1

)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入

DEPC

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DEPC

的终浓度?/p>

0.1%

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意:

DEPC

为剧毒物,活性很强,小心在通风柜中使用?/p>

  

2

)处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入

DEPC

水溶液,

使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中?/p>

  

3

)在通风柜中室温处理过夜?/p>

  

4

)将

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水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已

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水处理过?/p>

塑料制品的烧杯,高温高压蒸气灭菌至少

30

分钟?/p>

  

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)烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用?/p>

  

 

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一、分离纯化的基本原理

  

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质量的高低常常影?/p>

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是一种新型?/p>

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质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶?/p>

  

 

二、用户需自备的试剂和材料

  

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三、准备工?/p>

  

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酶非常稳定,是导?/p>

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降解最主要的物质。它在一些极端的

条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高?/p>

蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是

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完全失活。它广泛存在于人

的皮肤上,因此,在与

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制备有关的分子生物学实验时,必须戴手套?/p>

  

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的又一污染源是取液器,根据取液器制造商的要求对取液器进?/p>

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一般情况下采用?/p>

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配制?/p>

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乙醇擦洗取液器的内部和外部,

基本达到要求。取

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料制品的处理

  

 

尽可能使用无菌,

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如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则?/p>

都必须处理方可使用。处理步骤如下:

  

 

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)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入

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使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中?/p>

  

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水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已

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塑料制品的烧杯,高温高压蒸气灭菌至少

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Trizol法提取RNA实验步骤 - 百度文库
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一、分离纯化的基本原理

  

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化

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二、用户需自备的试剂和材料

  

无水乙醇、氯仿?/p>

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蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是

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乙醇擦洗取液器的内部和外部,

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料制品的处理

  

 

尽可能使用无菌,

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都必须处理方可使用。处理步骤如下:

  

 

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)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入

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)处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入

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水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已

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塑料制品的烧杯,高温高压蒸气灭菌至少

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