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第二次分子生物学实验报告

 

DNA

的酶切、连接、转化和重组子的筛选与鉴定

 

一?/p>

 

实验目的

 

1

?/p>

 

学习和掌握限制性内切酶的分类?/p>

特性与作用原理?/p>

掌握载体和外源目?/p>

DNA

?

切的操作技术?/p>

 

2

?/p>

 

学习利用

T4 DNA 

连接酶把酶切后的载体片段和外源目?/p>

DNA 

片段连接起来,构

建体外重?/p>

DNA 

分子的技术,了解并掌握几种常用的连接方法?/p>

 

3

?/p>

 

掌握利用

CaCl2 

制备感受态细胞的方法?/p>

学习和掌握热击法转化

E. coli 

的原理与

方法?/p>

 

4

?/p>

 

学习并掌握使用红白菌落法筛选获得重组子以及α互补筛选法的原理及方法?/p>

 

5

?/p>

 

学习和掌握使用试剂盒抽提质粒的方法;

 

6

?/p>

 

复习琼脂糖凝胶电泳的原理和方法;

 

7

?/p>

 

通过对重组子进行重组质粒

DNA 

的抽提与酶切鉴定,进一步确定重组质粒中?

有外源目?/p>

DNA 

片段,并验证重组子是期望的重组子?/p>

 

二?/p>

 

实验原理

 

1

、限制性内切酶

 

限制性核酸内切酶是一类能够识别双?/p>

DNA 

分子中的某种特定核苷酸序列,并由

此切?/p>

DNA 

双链结构的酶,主要是从原核生物中分离纯化出来的。在限制性核酸内?/p>

限制酶的作用下,侵入细菌的“外源?/p>

DNA 

分子便会被切割成不同大小的片段,而细

菌自己固有的

DNA 

由于修饰?/p>

(

通常是一种甲基化?/p>

)

的保护作用,

则可免受限制酶的?/p>

解?/p>

 

目前已经鉴定?/p>

3 

种不同类型的限制性核酸内切酶?/p>

即Ⅰ型酶?/p>

II 

型酶?/p>

III 

型酶?/p>

 

Ⅰ型酶切割位点是随机的,至少距识别位?/p>

1000bp

。Ⅲ型限制酶的切割位点距?/p>

别序?/p>

3'

端为

24

?/p>

26bp

。Ⅱ型限制酶的切割位点一般在识别序列上或与之靠近,而且

具有序列特异性,故在基因克隆中有特别广泛的用途?/p>

 

Ⅱ型核酸内切限制酶具?/p>

3

个基本的特性:①在

DNA 

分子双链的特异性识别序?/p>

部位切割

DNA 

分子,产生链的断裂;?/p>

2

个单链断裂部位在

DNA 

分子上的分布通常?/p>

是彼此直接相对的;③断裂结果形成?/p>

DNA 

片段往往具有互补的单链延伸末端?/p>

 

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第二次分子生物学实验报告

 

DNA

的酶切、连接、转化和重组子的筛选与鉴定

 

一?/p>

 

实验目的

 

1

?/p>

 

学习和掌握限制性内切酶的分类?/p>

特性与作用原理?/p>

掌握载体和外源目?/p>

DNA

?

切的操作技术?/p>

 

2

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学习利用

T4 DNA 

连接酶把酶切后的载体片段和外源目?/p>

DNA 

片段连接起来,构

建体外重?/p>

DNA 

分子的技术,了解并掌握几种常用的连接方法?/p>

 

3

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掌握利用

CaCl2 

制备感受态细胞的方法?/p>

学习和掌握热击法转化

E. coli 

的原理与

方法?/p>

 

4

?/p>

 

学习并掌握使用红白菌落法筛选获得重组子以及α互补筛选法的原理及方法?/p>

 

5

?/p>

 

学习和掌握使用试剂盒抽提质粒的方法;

 

6

?/p>

 

复习琼脂糖凝胶电泳的原理和方法;

 

7

?/p>

 

通过对重组子进行重组质粒

DNA 

的抽提与酶切鉴定,进一步确定重组质粒中?

有外源目?/p>

DNA 

片段,并验证重组子是期望的重组子?/p>

 

二?/p>

 

实验原理

 

1

、限制性内切酶

 

限制性核酸内切酶是一类能够识别双?/p>

DNA 

分子中的某种特定核苷酸序列,并由

此切?/p>

DNA 

双链结构的酶,主要是从原核生物中分离纯化出来的。在限制性核酸内?/p>

限制酶的作用下,侵入细菌的“外源?/p>

DNA 

分子便会被切割成不同大小的片段,而细

菌自己固有的

DNA 

由于修饰?/p>

(

通常是一种甲基化?/p>

)

的保护作用,

则可免受限制酶的?/p>

解?/p>

 

目前已经鉴定?/p>

3 

种不同类型的限制性核酸内切酶?/p>

即Ⅰ型酶?/p>

II 

型酶?/p>

III 

型酶?/p>

 

Ⅰ型酶切割位点是随机的,至少距识别位?/p>

1000bp

。Ⅲ型限制酶的切割位点距?/p>

别序?/p>

3'

端为

24

?/p>

26bp

。Ⅱ型限制酶的切割位点一般在识别序列上或与之靠近,而且

具有序列特异性,故在基因克隆中有特别广泛的用途?/p>

 

Ⅱ型核酸内切限制酶具?/p>

3

个基本的特性:①在

DNA 

分子双链的特异性识别序?/p>

部位切割

DNA 

分子,产生链的断裂;?/p>

2

个单链断裂部位在

DNA 

分子上的分布通常?/p>

是彼此直接相对的;③断裂结果形成?/p>

DNA 

片段往往具有互补的单链延伸末端?/p>

 

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DNA

的酶切、连接、转化和重组子的筛选与鉴定

 

一?/p>

 

实验目的

 

1

?/p>

 

学习和掌握限制性内切酶的分类?/p>

特性与作用原理?/p>

掌握载体和外源目?/p>

DNA

?

切的操作技术?/p>

 

2

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学习利用

T4 DNA 

连接酶把酶切后的载体片段和外源目?/p>

DNA 

片段连接起来,构

建体外重?/p>

DNA 

分子的技术,了解并掌握几种常用的连接方法?/p>

 

3

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掌握利用

CaCl2 

制备感受态细胞的方法?/p>

学习和掌握热击法转化

E. coli 

的原理与

方法?/p>

 

4

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学习并掌握使用红白菌落法筛选获得重组子以及α互补筛选法的原理及方法?/p>

 

5

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学习和掌握使用试剂盒抽提质粒的方法;

 

6

?/p>

 

复习琼脂糖凝胶电泳的原理和方法;

 

7

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通过对重组子进行重组质粒

DNA 

的抽提与酶切鉴定,进一步确定重组质粒中?

有外源目?/p>

DNA 

片段,并验证重组子是期望的重组子?/p>

 

二?/p>

 

实验原理

 

1

、限制性内切酶

 

限制性核酸内切酶是一类能够识别双?/p>

DNA 

分子中的某种特定核苷酸序列,并由

此切?/p>

DNA 

双链结构的酶,主要是从原核生物中分离纯化出来的。在限制性核酸内?/p>

限制酶的作用下,侵入细菌的“外源?/p>

DNA 

分子便会被切割成不同大小的片段,而细

菌自己固有的

DNA 

由于修饰?/p>

(

通常是一种甲基化?/p>

)

的保护作用,

则可免受限制酶的?/p>

解?/p>

 

目前已经鉴定?/p>

3 

种不同类型的限制性核酸内切酶?/p>

即Ⅰ型酶?/p>

II 

型酶?/p>

III 

型酶?/p>

 

Ⅰ型酶切割位点是随机的,至少距识别位?/p>

1000bp

。Ⅲ型限制酶的切割位点距?/p>

别序?/p>

3'

端为

24

?/p>

26bp

。Ⅱ型限制酶的切割位点一般在识别序列上或与之靠近,而且

具有序列特异性,故在基因克隆中有特别广泛的用途?/p>

 

Ⅱ型核酸内切限制酶具?/p>

3

个基本的特性:①在

DNA 

分子双链的特异性识别序?/p>

部位切割

DNA 

分子,产生链的断裂;?/p>

2

个单链断裂部位在

DNA 

分子上的分布通常?/p>

是彼此直接相对的;③断裂结果形成?/p>

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片段往往具有互补的单链延伸末端?/p>

 

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DNA的酶切、连接、转化和重组子的筛选与鉴定 - 百度文库
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的酶切、连接、转化和重组子的筛选与鉴定

 

一?/p>

 

实验目的

 

1

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学习和掌握限制性内切酶的分类?/p>

特性与作用原理?/p>

掌握载体和外源目?/p>

DNA

?

切的操作技术?/p>

 

2

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学习利用

T4 DNA 

连接酶把酶切后的载体片段和外源目?/p>

DNA 

片段连接起来,构

建体外重?/p>

DNA 

分子的技术,了解并掌握几种常用的连接方法?/p>

 

3

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掌握利用

CaCl2 

制备感受态细胞的方法?/p>

学习和掌握热击法转化

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的原理与

方法?/p>

 

4

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学习并掌握使用红白菌落法筛选获得重组子以及α互补筛选法的原理及方法?/p>

 

5

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学习和掌握使用试剂盒抽提质粒的方法;

 

6

?/p>

 

复习琼脂糖凝胶电泳的原理和方法;

 

7

?/p>

 

通过对重组子进行重组质粒

DNA 

的抽提与酶切鉴定,进一步确定重组质粒中?

有外源目?/p>

DNA 

片段,并验证重组子是期望的重组子?/p>

 

二?/p>

 

实验原理

 

1

、限制性内切酶

 

限制性核酸内切酶是一类能够识别双?/p>

DNA 

分子中的某种特定核苷酸序列,并由

此切?/p>

DNA 

双链结构的酶,主要是从原核生物中分离纯化出来的。在限制性核酸内?/p>

限制酶的作用下,侵入细菌的“外源?/p>

DNA 

分子便会被切割成不同大小的片段,而细

菌自己固有的

DNA 

由于修饰?/p>

(

通常是一种甲基化?/p>

)

的保护作用,

则可免受限制酶的?/p>

解?/p>

 

目前已经鉴定?/p>

3 

种不同类型的限制性核酸内切酶?/p>

即Ⅰ型酶?/p>

II 

型酶?/p>

III 

型酶?/p>

 

Ⅰ型酶切割位点是随机的,至少距识别位?/p>

1000bp

。Ⅲ型限制酶的切割位点距?/p>

别序?/p>

3'

端为

24

?/p>

26bp

。Ⅱ型限制酶的切割位点一般在识别序列上或与之靠近,而且

具有序列特异性,故在基因克隆中有特别广泛的用途?/p>

 

Ⅱ型核酸内切限制酶具?/p>

3

个基本的特性:①在

DNA 

分子双链的特异性识别序?/p>

部位切割

DNA 

分子,产生链的断裂;?/p>

2

个单链断裂部位在

DNA 

分子上的分布通常?/p>

是彼此直接相对的;③断裂结果形成?/p>

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片段往往具有互补的单链延伸末端?/p>

 



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