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表达载体的构建方法及步骤
一、载体的选择及如何阅读质粒图?/p>
目前,载体主要有病毒和非病毒两大?/p>
,
其中质粒
DNA
是一种新的非病毒转基
因载体?/p>
一个合格质粒的组成要素?/p>
?/p>
1
)复制起始位?/p>
Ori
即控制复制起始的位点。原核生?/p>
DNA
分子中只?/p>
一个复制起始点。?/p>
真核生物
DNA
分子有多个复制起始位点?/p>
?/p>
2
)抗生素抗性基因可以便于加以检测,?/p>
Amp+ ,Kan+
?/p>
3
)多克隆位点
MCS
克隆携带外源基因片段
?/p>
4
?/p>
P/E
启动?/p>
/
增强?/p>
?/p>
5
?/p>
Terms
终止信号
?/p>
6
)加
poly
?/p>
A
)信号可以起到稳?/p>
mRNA
作用
选择载体主要依据构建的目的,
同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点?/p>
?/p>
果构建的?/p>
的是要表达一个特定的基因,则要选择合适的表达载体?/p>
载体选择主要考虑下述
3
点:
?/p>
1
】构?/p>
DNA
重组体的目的,克隆扩?/p>
/
基因表达,选择合适的克隆载体
/
?/p>
达载体?/p>
?/p>
2
?/p>
.
载体的类型:
?/p>
1
)克隆载体的克隆能力-据克隆片段大小
(大选大,小选小)。如
<10kb
?