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1
?/p>
深圳大学考试答题?/p>
(
以论文、报告等形式考核专用
)
二○
一
一
~二?/p>
一
?/p>
学年度第
2
学期
课程编号
课程名称
生物信息?/p>
主讲教师
苏庆?/p>
李凌?/p>
买制?/p>
评分
?/p>
?/p>
姓名
专业年级
2012
级生物医学工程(医)
教师评语?/p>
题目?/p>
小鼠肿瘤坏死因子α启动子荧光素酶表达载体的构建
摘要:利?/p>
NCBI genebank
数据库及
genetool
软件设计引物,克隆小?/p>
TNF-
α启动子序列,将其插入荧光素酶表达载体
pGL3-basic
中。将经过鉴定的重?/p>
载体
pGL3-TNF
α
-promoter
转染巨噬细胞
264.7
?/p>
应用萤光素酶检测系统检测其
活性?/p>
1.
查找启动子序列:
打开
NCBI
?/p>
Map viewer
网站?/p>
网址
.nih.gov/mapview/index.html
?/p>
输入要查?/p>
?/p>
TNF-
α,得如下结果?/p>
再点击右下方
quick filter
勾上
gene
选项,找?/p>
TNF-alpha
基因所在染色体上的位置?/p>
点击
17
号染色体上的
Genes seq
(注:下边的几个序列也是一样的,一般选第一个即可)?/p>
现如下信息:
点击?/p>
Download/View Sequence/Evidence
,查看基因序列:
Sequence Format
选择
Genebank
形式?/p>
再点?/p>
Display,
出现?/p>
目的基因的相关序列以及信息?/p>
可知转录位点从基?/p>
1956
位开始转录,由于内含子的存在,所?/p>
mRNA
?/p>
DNA
上序列上
分成了几段?/p>
promoter
位于转录起始位点上游?/p>
2000bp
区域,启动子序列为:
2.
引物设计
?/p>
NCBI
查出小鼠
TNF-
α
的基因的
CDS
?/p>
打开网站?/p>
/index.php
,查询在这段开放阅读框?/p>
0 cutter
的酶,并结合结合实际情况,使?/p>
列表中的
Xho
?/p>
?/p>
HindIII
作为引物酶?/p>