TCID
50
测定
50
%组织细胞感染量
(50
?/p>
Tissue culture infection dose, TCID
50
)
?/p>
指能使半数单层细胞管
(
?/p>
)
出现细胞病变的病毒稀释度。用此方法可以估?/p>
病毒感染性的强弱及病毒的含量,但不能准确测定感染性病毒颗粒的多少?/p>
TCID50
?/p>
PFU
换算
:
PFUs
?.7×TCID50
的滴?/p>
?/p>
TCID50
法测到的滴度值比
标准空斑法高
0.7
?/p>
PFU
:蚀斑形成单位,
plaque forming unit
)。感染性滴
度的单位一般表示为
PFU/ml
?/p>
由于测定
pfu
往往重复性较差,
因此近些年许?/p>
研究又开始采?/p>
TCID50
方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使?/p>
TCID50
法?/p>
【实验材料?/p>
1
?/p>
已长成单层的
MDCK
细胞?/p>
96
微孔培养?/p>
2
?/p>
甲型
H1N1
病毒?/p>
3
?/p>
病毒稀释液(含
1.0
µg/ml
TPCK
胰酶的无血?/p>
DMEM
;注:除?/p>
H5
高致?/p>
型流感病毒稀释时用无血?/p>
DMEM
外,其它亚型的流感病毒稀释时都用?/p>
1.0
µg/ml
胰酶的无血?/p>
DMEM
。有?/p>
H5
型也加。加入胰酶的作用:使
HA
解离为发挥活性的形式?/p>
HA
1
?/p>
HA
0
。这里用的胰酶是实验室专门配制的?/p>
不同于传细胞用的胰酶。)注:
TPCK
胰酶:原始浓?/p>
100
µg/ml?/p>
4
.灭?/p>
PBS
、二氧化碳(
CO
2
)培养箱、倒置显微镜等
【实验步骤?/p>
1
?/p>
取无?/p>
EP
?/p>
10
支,各管分别加病毒稀释液
0.9
mL
,然后向第一管加?/p>
?/p>
H1N1
病毒?/p>
0.1mL
?/p>
反复混合
3
次,
用另一新吸管从第一管内吸液
0.1
mL
加入至第二管内,
反复混合
3
次,
再换一新吸管,
从第二管吸液
0.1
mL