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土壤磷酸酶(酸性)——磷酸苯二钠比色?/p>

 

(一)试?/p>

 

1. pH5

醋酸盐缓冲液?/p>

 

A:0.2mol/L 

醋酸溶液?/p>

11.55ml

稀释至

1000ml

?/p>

 

B:0.2mol/L

醋酸钠溶?/p>

 A

?/p>

14.8ml+B

?/p>

35.2ml

稀释至

100ml 

若使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙酸盐缓冲液,则需要无水乙酸及乙酸钠的量计

算如下:

①无水乙酸用量的计算?/p>

无水乙酸的浓度为

17.5M

?/p>

则需无水乙酸的体积为

0.071

×

1000/17.5=4.1

(毫升)

;②乙酸钠用量的计算:查表知,无水乙酸钠的摩尔质量为

82

,则需无水乙酸钠的质量?/p>

0.13

×

82

×

1=11

(克?/p>

。使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙酸盐缓冲液的方法如下:用量筒?/p>

?/p>

4.1

毫升无水乙酸?/p>

1000

毫升烧杯内,再用台秤称取无水乙酸?/p>

11

克至该烧杯,然后用量筒量?/p>

1000-4.1=996

毫升蒸馏水至该烧杯内,搅拌至乙酸钠溶解并呈均匀的溶液即?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙

?/p>

-

乙酸钠缓冲液?/p>

 

或者:?/p>

7ml 0.2M

醋酸钠液

+3ml 0.2M

醋酸液混合即得?/p>

 

2. 0.5%

磷酸苯二钠:

pH5

醋酸缓冲?/p>

 

3. 

氯代二溴对苯醌亚胺:称取

0.125g 2

?/p>

6-

二溴苯醌氯酰亚胺,用

10ml 96%

乙醇?/p>

48ml

乙醇

+2ml

水)溶解,贮存于棕色瓶中,存放在冰箱中,保存的黄?/p>

溶液未变褐色之前均可使用?/p>

 

4. 

酚标准溶液:

酚原?/p>

---

?/p>

1g

苯酚溶于蒸馏水中?/p>

定容?/p>

1000ml

水中?/p>

保存

于棕色瓶中?/p>

酚工作液

---

?/p>

10 

ml

酚原液稀释至

1000ml

水中?/p>

每毫升含

0.01mg

?/p>

 

5. 

甲苯

 

6.0.3%

硫酸铝溶液,称取

0.3g

硫酸铝,定容?/p>

100ml

?/p>

 

(二)实验步?/p>

 

1. 

标线制作

 

?/p>

0

?/p>

1

?/p>

3

?/p>

5

?/p>

7

?/p>

9

?/p>

11

?/p>

13ml

酚工作液,置?/p>

50ml

容量瓶中,加?/p>

5ml

缓冲

液和

4

滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度?/p>

30min

后比色测定。以

光密度值为纵坐标,浓度为横坐标绘成标准曲线?/p>

 

2. 

样品测定

 

称取风干土样

(过

20

目筛?/p>

去除杂质?/p>

5.0000g

?/p>

放置?/p>

200ml

容量?/p>

(离心管?/p>

中,?/p>

2.5ml

甲苯,轻?/p>

15min

后,加入

20ml 

0.5%

磷酸苯二钠,仔细摇匀后放

置于

37

°

C

恒温箱中培养

24h

?/p>

后于培养液中加入

0.3%

硫酸铝溶液过滤?/p>

吸取?/p>

?/p>

3ml

?/p>

50ml

比色管中,按标准曲线方法显色,于波长

578nm

处测定颜色的?/p>

度,读取吸光值?/p>

 

对每一土样,设置用

10mL

水代替磷酸苯二钠基质的对照。并作空白无土对照?

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土壤磷酸酶(酸性)——磷酸苯二钠比色?/p>

 

(一)试?/p>

 

1. pH5

醋酸盐缓冲液?/p>

 

A:0.2mol/L 

醋酸溶液?/p>

11.55ml

稀释至

1000ml

?/p>

 

B:0.2mol/L

醋酸钠溶?/p>

 A

?/p>

14.8ml+B

?/p>

35.2ml

稀释至

100ml 

若使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙酸盐缓冲液,则需要无水乙酸及乙酸钠的量计

算如下:

①无水乙酸用量的计算?/p>

无水乙酸的浓度为

17.5M

?/p>

则需无水乙酸的体积为

0.071

×

1000/17.5=4.1

(毫升)

;②乙酸钠用量的计算:查表知,无水乙酸钠的摩尔质量为

82

,则需无水乙酸钠的质量?/p>

0.13

×

82

×

1=11

(克?/p>

。使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙酸盐缓冲液的方法如下:用量筒?/p>

?/p>

4.1

毫升无水乙酸?/p>

1000

毫升烧杯内,再用台秤称取无水乙酸?/p>

11

克至该烧杯,然后用量筒量?/p>

1000-4.1=996

毫升蒸馏水至该烧杯内,搅拌至乙酸钠溶解并呈均匀的溶液即?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙

?/p>

-

乙酸钠缓冲液?/p>

 

或者:?/p>

7ml 0.2M

醋酸钠液

+3ml 0.2M

醋酸液混合即得?/p>

 

2. 0.5%

磷酸苯二钠:

pH5

醋酸缓冲?/p>

 

3. 

氯代二溴对苯醌亚胺:称取

0.125g 2

?/p>

6-

二溴苯醌氯酰亚胺,用

10ml 96%

乙醇?/p>

48ml

乙醇

+2ml

水)溶解,贮存于棕色瓶中,存放在冰箱中,保存的黄?/p>

溶液未变褐色之前均可使用?/p>

 

4. 

酚标准溶液:

酚原?/p>

---

?/p>

1g

苯酚溶于蒸馏水中?/p>

定容?/p>

1000ml

水中?/p>

保存

于棕色瓶中?/p>

酚工作液

---

?/p>

10 

ml

酚原液稀释至

1000ml

水中?/p>

每毫升含

0.01mg

?/p>

 

5. 

甲苯

 

6.0.3%

硫酸铝溶液,称取

0.3g

硫酸铝,定容?/p>

100ml

?/p>

 

(二)实验步?/p>

 

1. 

标线制作

 

?/p>

0

?/p>

1

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3

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5

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7

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9

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11

?/p>

13ml

酚工作液,置?/p>

50ml

容量瓶中,加?/p>

5ml

缓冲

液和

4

滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度?/p>

30min

后比色测定。以

光密度值为纵坐标,浓度为横坐标绘成标准曲线?/p>

 

2. 

样品测定

 

称取风干土样

(过

20

目筛?/p>

去除杂质?/p>

5.0000g

?/p>

放置?/p>

200ml

容量?/p>

(离心管?/p>

中,?/p>

2.5ml

甲苯,轻?/p>

15min

后,加入

20ml 

0.5%

磷酸苯二钠,仔细摇匀后放

置于

37

°

C

恒温箱中培养

24h

?/p>

后于培养液中加入

0.3%

硫酸铝溶液过滤?/p>

吸取?/p>

?/p>

3ml

?/p>

50ml

比色管中,按标准曲线方法显色,于波长

578nm

处测定颜色的?/p>

度,读取吸光值?/p>

 

对每一土样,设置用

10mL

水代替磷酸苯二钠基质的对照。并作空白无土对照?

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(一)试?/p>

 

1. pH5

醋酸盐缓冲液?/p>

 

A:0.2mol/L 

醋酸溶液?/p>

11.55ml

稀释至

1000ml

?/p>

 

B:0.2mol/L

醋酸钠溶?/p>

 A

?/p>

14.8ml+B

?/p>

35.2ml

稀释至

100ml 

若使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙酸盐缓冲液,则需要无水乙酸及乙酸钠的量计

算如下:

①无水乙酸用量的计算?/p>

无水乙酸的浓度为

17.5M

?/p>

则需无水乙酸的体积为

0.071

×

1000/17.5=4.1

(毫升)

;②乙酸钠用量的计算:查表知,无水乙酸钠的摩尔质量为

82

,则需无水乙酸钠的质量?/p>

0.13

×

82

×

1=11

(克?/p>

。使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙酸盐缓冲液的方法如下:用量筒?/p>

?/p>

4.1

毫升无水乙酸?/p>

1000

毫升烧杯内,再用台秤称取无水乙酸?/p>

11

克至该烧杯,然后用量筒量?/p>

1000-4.1=996

毫升蒸馏水至该烧杯内,搅拌至乙酸钠溶解并呈均匀的溶液即?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙

?/p>

-

乙酸钠缓冲液?/p>

 

或者:?/p>

7ml 0.2M

醋酸钠液

+3ml 0.2M

醋酸液混合即得?/p>

 

2. 0.5%

磷酸苯二钠:

pH5

醋酸缓冲?/p>

 

3. 

氯代二溴对苯醌亚胺:称取

0.125g 2

?/p>

6-

二溴苯醌氯酰亚胺,用

10ml 96%

乙醇?/p>

48ml

乙醇

+2ml

水)溶解,贮存于棕色瓶中,存放在冰箱中,保存的黄?/p>

溶液未变褐色之前均可使用?/p>

 

4. 

酚标准溶液:

酚原?/p>

---

?/p>

1g

苯酚溶于蒸馏水中?/p>

定容?/p>

1000ml

水中?/p>

保存

于棕色瓶中?/p>

酚工作液

---

?/p>

10 

ml

酚原液稀释至

1000ml

水中?/p>

每毫升含

0.01mg

?/p>

 

5. 

甲苯

 

6.0.3%

硫酸铝溶液,称取

0.3g

硫酸铝,定容?/p>

100ml

?/p>

 

(二)实验步?/p>

 

1. 

标线制作

 

?/p>

0

?/p>

1

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3

?/p>

5

?/p>

7

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9

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11

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13ml

酚工作液,置?/p>

50ml

容量瓶中,加?/p>

5ml

缓冲

液和

4

滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度?/p>

30min

后比色测定。以

光密度值为纵坐标,浓度为横坐标绘成标准曲线?/p>

 

2. 

样品测定

 

称取风干土样

(过

20

目筛?/p>

去除杂质?/p>

5.0000g

?/p>

放置?/p>

200ml

容量?/p>

(离心管?/p>

中,?/p>

2.5ml

甲苯,轻?/p>

15min

后,加入

20ml 

0.5%

磷酸苯二钠,仔细摇匀后放

置于

37

°

C

恒温箱中培养

24h

?/p>

后于培养液中加入

0.3%

硫酸铝溶液过滤?/p>

吸取?/p>

?/p>

3ml

?/p>

50ml

比色管中,按标准曲线方法显色,于波长

578nm

处测定颜色的?/p>

度,读取吸光值?/p>

 

对每一土样,设置用

10mL

水代替磷酸苯二钠基质的对照。并作空白无土对照?

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土壤酶测定方?- 百度文库
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土壤磷酸酶(酸性)——磷酸苯二钠比色?/p>

 

(一)试?/p>

 

1. pH5

醋酸盐缓冲液?/p>

 

A:0.2mol/L 

醋酸溶液?/p>

11.55ml

稀释至

1000ml

?/p>

 

B:0.2mol/L

醋酸钠溶?/p>

 A

?/p>

14.8ml+B

?/p>

35.2ml

稀释至

100ml 

若使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙酸盐缓冲液,则需要无水乙酸及乙酸钠的量计

算如下:

①无水乙酸用量的计算?/p>

无水乙酸的浓度为

17.5M

?/p>

则需无水乙酸的体积为

0.071

×

1000/17.5=4.1

(毫升)

;②乙酸钠用量的计算:查表知,无水乙酸钠的摩尔质量为

82

,则需无水乙酸钠的质量?/p>

0.13

×

82

×

1=11

(克?/p>

。使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙酸盐缓冲液的方法如下:用量筒?/p>

?/p>

4.1

毫升无水乙酸?/p>

1000

毫升烧杯内,再用台秤称取无水乙酸?/p>

11

克至该烧杯,然后用量筒量?/p>

1000-4.1=996

毫升蒸馏水至该烧杯内,搅拌至乙酸钠溶解并呈均匀的溶液即?/p>

1

?/p>

0.2M 

PH

?/p>

5.0

的乙

?/p>

-

乙酸钠缓冲液?/p>

 

或者:?/p>

7ml 0.2M

醋酸钠液

+3ml 0.2M

醋酸液混合即得?/p>

 

2. 0.5%

磷酸苯二钠:

pH5

醋酸缓冲?/p>

 

3. 

氯代二溴对苯醌亚胺:称取

0.125g 2

?/p>

6-

二溴苯醌氯酰亚胺,用

10ml 96%

乙醇?/p>

48ml

乙醇

+2ml

水)溶解,贮存于棕色瓶中,存放在冰箱中,保存的黄?/p>

溶液未变褐色之前均可使用?/p>

 

4. 

酚标准溶液:

酚原?/p>

---

?/p>

1g

苯酚溶于蒸馏水中?/p>

定容?/p>

1000ml

水中?/p>

保存

于棕色瓶中?/p>

酚工作液

---

?/p>

10 

ml

酚原液稀释至

1000ml

水中?/p>

每毫升含

0.01mg

?/p>

 

5. 

甲苯

 

6.0.3%

硫酸铝溶液,称取

0.3g

硫酸铝,定容?/p>

100ml

?/p>

 

(二)实验步?/p>

 

1. 

标线制作

 

?/p>

0

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1

?/p>

3

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5

?/p>

7

?/p>

9

?/p>

11

?/p>

13ml

酚工作液,置?/p>

50ml

容量瓶中,加?/p>

5ml

缓冲

液和

4

滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度?/p>

30min

后比色测定。以

光密度值为纵坐标,浓度为横坐标绘成标准曲线?/p>

 

2. 

样品测定

 

称取风干土样

(过

20

目筛?/p>

去除杂质?/p>

5.0000g

?/p>

放置?/p>

200ml

容量?/p>

(离心管?/p>

中,?/p>

2.5ml

甲苯,轻?/p>

15min

后,加入

20ml 

0.5%

磷酸苯二钠,仔细摇匀后放

置于

37

°

C

恒温箱中培养

24h

?/p>

后于培养液中加入

0.3%

硫酸铝溶液过滤?/p>

吸取?/p>

?/p>

3ml

?/p>

50ml

比色管中,按标准曲线方法显色,于波长

578nm

处测定颜色的?/p>

度,读取吸光值?/p>

 

对每一土样,设置用

10mL

水代替磷酸苯二钠基质的对照。并作空白无土对照?



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