土壤磷酸酶(酸性)——磷酸苯二钠比色?/p>
(一)试?/p>
1. pH5
醋酸盐缓冲液?/p>
A:0.2mol/L
醋酸溶液?/p>
11.55ml
稀释至
1000ml
?/p>
B:0.2mol/L
醋酸钠溶?/p>
A
?/p>
14.8ml+B
?/p>
35.2ml
稀释至
100ml
若使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>
1
?/p>
0.2M
PH
?/p>
5.0
的乙酸盐缓冲液,则需要无水乙酸及乙酸钠的量计
算如下:
①无水乙酸用量的计算?/p>
无水乙酸的浓度为
17.5M
?/p>
则需无水乙酸的体积为
0.071
×
1000/17.5=4.1
(毫升)
;②乙酸钠用量的计算:查表知,无水乙酸钠的摩尔质量为
82
,则需无水乙酸钠的质量?/p>
0.13
×
82
×
1=11
(克?/p>
。使用无水乙酸及乙酸钠配?/p>
1
?/p>
0.2M
PH
?/p>
5.0
的乙酸盐缓冲液的方法如下:用量筒?/p>
?/p>
4.1
毫升无水乙酸?/p>
1000
毫升烧杯内,再用台秤称取无水乙酸?/p>
11
克至该烧杯,然后用量筒量?/p>
1000-4.1=996
毫升蒸馏水至该烧杯内,搅拌至乙酸钠溶解并呈均匀的溶液即?/p>
1
?/p>
0.2M
PH
?/p>
5.0
的乙
?/p>
-
乙酸钠缓冲液?/p>
或者:?/p>
7ml 0.2M
醋酸钠液
+3ml 0.2M
醋酸液混合即得?/p>
2. 0.5%
磷酸苯二钠:
pH5
醋酸缓冲?/p>
3.
氯代二溴对苯醌亚胺:称取
0.125g 2
?/p>
6-
二溴苯醌氯酰亚胺,用
10ml 96%
乙醇?/p>
48ml
乙醇
+2ml
水)溶解,贮存于棕色瓶中,存放在冰箱中,保存的黄?/p>
溶液未变褐色之前均可使用?/p>
4.
酚标准溶液:
酚原?/p>
---
?/p>
1g
苯酚溶于蒸馏水中?/p>
定容?/p>
1000ml
水中?/p>
保存
于棕色瓶中?/p>
酚工作液
---
?/p>
10
ml
酚原液稀释至
1000ml
水中?/p>
每毫升含
0.01mg
?/p>
5.
甲苯
6.0.3%
硫酸铝溶液,称取
0.3g
硫酸铝,定容?/p>
100ml
?/p>
(二)实验步?/p>
1.
标线制作
?/p>
0
?/p>
1
?/p>
3
?/p>
5
?/p>
7
?/p>
9
?/p>
11
?/p>
13ml
酚工作液,置?/p>
50ml
容量瓶中,加?/p>
5ml
缓冲
液和
4
滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度?/p>
30min
后比色测定。以
光密度值为纵坐标,浓度为横坐标绘成标准曲线?/p>
2.
样品测定
称取风干土样
(过
20
目筛?/p>
去除杂质?/p>
5.0000g
?/p>
放置?/p>
200ml
容量?/p>
(离心管?/p>
中,?/p>
2.5ml
甲苯,轻?/p>
15min
后,加入
20ml
0.5%
磷酸苯二钠,仔细摇匀后放
置于
37
°
C
恒温箱中培养
24h
?/p>
后于培养液中加入
0.3%
硫酸铝溶液过滤?/p>
吸取?/p>
?/p>
3ml
?/p>
50ml
比色管中,按标准曲线方法显色,于波长
578nm
处测定颜色的?/p>
度,读取吸光值?/p>
对每一土样,设置用
10mL
水代替磷酸苯二钠基质的对照。并作空白无土对照?