鍒樿��鍏塤澶氶澏鐐筽CRISPR杞戒綋(鍗曞瓙鍙跺拰鍙屽瓙鍙舵�嶇墿鐢�)浣跨敤鏂规硶2015-4-14(new)(1) - 鐧惧害鏂囧簱

鏂板缓

涓婁紶

棣栭〉

鍔╂墜

鏈�杩?/div>

璧勬枡搴?/div>

宸ュ叿

 

1 

 

CRISPR/Cas9-based genome editing technology 

A robust CRISPR/Cas9 vector system for multiplex targeting of 

genomic sites in monocot and dicot plants

 

 

浜氱儹甯﹀啘涓氱敓鐗╄祫婧愪繚鎶や笌鍒╃敤鍥藉�堕噸鐐瑰疄楠屽�?/p>

 

鍗庡崡鍐滀笟澶у�︾敓鍛界�戝�﹀�﹂櫌

 

鍒樿��鍏夎�鹃�樼粍

 

(

**************.cn

) 

 

1.

 

pYLCRISPR/Cas9

澶氶澏鐐硅浇浣撲粙缁?/p>

 

CRISPR/Cas9

鏄�鏂拌繎鍙戝睍鐨勫熀鍥犵粍缂栬緫鎶�鏈?/p>

锛堝浘

1

锛?/p>

銆?/p>

CRISPR/Cas9

鍒囧壊闈跺簭鍒椾粎闇�瑕?/p>

single-guide RNA 

(sgRNA)

浠ュ強鐢?/p>

sgRNA

寮曞�肩�?/p>

Cas9

铔嬬櫧锛屾瘮閿屾寚鏍搁吀閰讹紙

ZFNs

锛?/p>

锛?/p>

TALENs

鏇村姞绠�渚匡紝楂樻晥锛屽洜鑰屾垚涓哄熀

鍥犵粍缂栬緫宸ュ叿鐨勯�栭�夈�?/p>

 

鎴戜滑鍒╃敤

CRISPR/Cas9

鎶�鏈�鍙�鏂逛究鍦拌繘琛屽�氶噸闈跺悜鐨勭壒寰侊紝鏋勫缓浜嗕竴濂楃敤浜庡崟瀛愬彾鍜屽弻瀛愬彾妞嶇墿鐨勫��

闈剁偣

CRISPR/Cas9

鍩哄洜鎵撻澏杞戒綋绯荤粺銆?/p>

 

鏈�濂楄浇浣撳�?/p>

Cas9

铔嬬櫧琛ㄨ揪鐩掓暣鍚堝埌鍙屽厓杞戒綋涓婏紝

鐢ㄤ簬瑁呰浇澶氫釜

sgRNA

琛ㄨ揪鐩掔殑澶氬厠闅嗕綅鐐?/p>

Bsa

 I

浣嶄簬

闈犺繎鍙屽厓杞戒綋

RB

浣嶇疆銆?/p>

sgRNA

琛ㄨ揪鐩掑厓浠惰�惧湪涓�闂磋川绮掕浇浣撲笂锛屽埄鐢ㄩ叾鍒囪繛鎺ュ拰

PCR

鏂规硶鎷艰�呭ソ锛屽啀鍒�

鐢?/p>

Golden Gate

鎴?/p>

Gibson Assembly

鍏嬮殕鏂规硶缁勮�呭埌鍙屽厓杞戒綋涓娿�?/p>

 

5鈥?nbsp;NNNNNNNNNNNN

GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

Target Site 

PAM

NNNNNNNNNNNN-

3鈥?/p>

3鈥?nbsp;NNNNNNNNNNNN

NCCNNNNNNNNNNNN-

5鈥?/p>

NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

5鈥?/p>

-

G/A

NNNNNNNNNNNNNNNNNNNN

GUUUUAGAGCUAG

A

A

CGAUA

GAA

AACUAUUGCCUGAUCGGAAUAAAAUU

Cas9 

nuclease

Cleavage site

genome 

sequence

RuvC-like domain

HNH domain

CUUGAAAAAGUGGCACCGA

G

CGUGGCU

UUUUU-

3鈥?

NGG

 

Figure 1. A working model of the CRISPR/Cas9 system. The Cas9-sgRNA complex locates to the target site 

to 

cleave the DNA to produce double strand break (DSB).