新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

模块?/p>

 

蛋白质之间的相互作用

 

1. 

实验目的

 

本实验以重组质粒和酵母细胞为材料

, 

学习检测蛋白质相互作用的基本原理和

技术方法?/p>

 

主要?/p>

 

绍酵母双杂交的基本原理与操作技?/p>

; 

让学生了解和掌握酵母

双杂交系统的应用

; 

掌握酵母感受态的

 

制备的基本原理和主要的操作步骤?/p>

 

2. 

实验原理

 

1989

?/p>

 Fields 

?/p>

 Song 

等人根据当时人们对真核生物转录起始过程调控的认识

(

即细胞内基因?/p>

 

录的起始需要转录激活因子的参与

 ,

提出并建立了酵母双杂交系

统。该系统作为发现和研究活细胞

 

体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技?/p>

平台

,

近几年得到了广泛的运用和发展?/p>

 

相比于其它蛋白质筛选系?/p>

,

酵母双杂交系统具有以下优?/p>

:(1

检测在真核活细

胞内进行

,

?/p>

 

一定程度上代表细胞内的真实情况?/p>

 (2

作用信号是在融合基因表达?/p>

,

在细胞内重建转录因子的作

 

用而给出的

,

省去了纯化蛋白质的繁琐步骤?/p>

 (3

检测结

果是基因表达产物的积累效?/p>

,

因而可检?/p>

 

存在于蛋白质之间的微弱或暂时的相?/p>

作用?/p>

 (4

酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类?/p>

 

和分化时期材料构?/p>

 

cDNA 

文库

,

能分析细胞质、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功

 

能蛋

白?/p>

 (5 

通过

 mRNA 

产生多种稳定的酶使信号放大。同?/p>

,

酵母表型?/p>

 X-Gal 

?/p>

 

HIS3 

蛋白?/p>

 

达等检测方法均很敏感?/p>

 

酵母双杂交系统也具有一定的局限性?/p>

 

首先

, 

经典的双杂交系统分析蛋白间的

相互作用定位于细

 

胞核?/p>

, 

因而限制了该系统对某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋?/p>

的研究?/p>

 

酵母双杂交系统的另一个局

 

限性是

?/p>

假阳?/p>

?nbsp;

。在酵母双杂交系统建立的

初期阶段

,

由于仅仅采用

 

β

-

半乳糖苷酶这一单一的报?/p>

 

基因体系

,

这种报告基因的表

达往往不能十分严谨地被控制

,

因此容易产生假阳性。由于某些蛋白本

 

身具有激?/p>

转录的功能或在酵母中表达时发挥转录激活作?/p>

, 

?/p>

 DNA 

结合结构域融合蛋白在

无特?/p>

 

激活结构域的情况下也可被激活转录?/p>

 

另外某些蛋白表面含有对多种蛋?

Ͼλ
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

模块?/p>

 

蛋白质之间的相互作用

 

1. 

实验目的

 

本实验以重组质粒和酵母细胞为材料

, 

学习检测蛋白质相互作用的基本原理和

技术方法?/p>

 

主要?/p>

 

绍酵母双杂交的基本原理与操作技?/p>

; 

让学生了解和掌握酵母

双杂交系统的应用

; 

掌握酵母感受态的

 

制备的基本原理和主要的操作步骤?/p>

 

2. 

实验原理

 

1989

?/p>

 Fields 

?/p>

 Song 

等人根据当时人们对真核生物转录起始过程调控的认识

(

即细胞内基因?/p>

 

录的起始需要转录激活因子的参与

 ,

提出并建立了酵母双杂交系

统。该系统作为发现和研究活细胞

 

体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技?/p>

平台

,

近几年得到了广泛的运用和发展?/p>

 

相比于其它蛋白质筛选系?/p>

,

酵母双杂交系统具有以下优?/p>

:(1

检测在真核活细

胞内进行

,

?/p>

 

一定程度上代表细胞内的真实情况?/p>

 (2

作用信号是在融合基因表达?/p>

,

在细胞内重建转录因子的作

 

用而给出的

,

省去了纯化蛋白质的繁琐步骤?/p>

 (3

检测结

果是基因表达产物的积累效?/p>

,

因而可检?/p>

 

存在于蛋白质之间的微弱或暂时的相?/p>

作用?/p>

 (4

酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类?/p>

 

和分化时期材料构?/p>

 

cDNA 

文库

,

能分析细胞质、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功

 

能蛋

白?/p>

 (5 

通过

 mRNA 

产生多种稳定的酶使信号放大。同?/p>

,

酵母表型?/p>

 X-Gal 

?/p>

 

HIS3 

蛋白?/p>

 

达等检测方法均很敏感?/p>

 

酵母双杂交系统也具有一定的局限性?/p>

 

首先

, 

经典的双杂交系统分析蛋白间的

相互作用定位于细

 

胞核?/p>

, 

因而限制了该系统对某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋?/p>

的研究?/p>

 

酵母双杂交系统的另一个局

 

限性是

?/p>

假阳?/p>

?nbsp;

。在酵母双杂交系统建立的

初期阶段

,

由于仅仅采用

 

β

-

半乳糖苷酶这一单一的报?/p>

 

基因体系

,

这种报告基因的表

达往往不能十分严谨地被控制

,

因此容易产生假阳性。由于某些蛋白本

 

身具有激?/p>

转录的功能或在酵母中表达时发挥转录激活作?/p>

, 

?/p>

 DNA 

结合结构域融合蛋白在

无特?/p>

 

激活结构域的情况下也可被激活转录?/p>

 

另外某些蛋白表面含有对多种蛋?

">
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

模块?/p>

 

蛋白质之间的相互作用

 

1. 

实验目的

 

本实验以重组质粒和酵母细胞为材料

, 

学习检测蛋白质相互作用的基本原理和

技术方法?/p>

 

主要?/p>

 

绍酵母双杂交的基本原理与操作技?/p>

; 

让学生了解和掌握酵母

双杂交系统的应用

; 

掌握酵母感受态的

 

制备的基本原理和主要的操作步骤?/p>

 

2. 

实验原理

 

1989

?/p>

 Fields 

?/p>

 Song 

等人根据当时人们对真核生物转录起始过程调控的认识

(

即细胞内基因?/p>

 

录的起始需要转录激活因子的参与

 ,

提出并建立了酵母双杂交系

统。该系统作为发现和研究活细胞

 

体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技?/p>

平台

,

近几年得到了广泛的运用和发展?/p>

 

相比于其它蛋白质筛选系?/p>

,

酵母双杂交系统具有以下优?/p>

:(1

检测在真核活细

胞内进行

,

?/p>

 

一定程度上代表细胞内的真实情况?/p>

 (2

作用信号是在融合基因表达?/p>

,

在细胞内重建转录因子的作

 

用而给出的

,

省去了纯化蛋白质的繁琐步骤?/p>

 (3

检测结

果是基因表达产物的积累效?/p>

,

因而可检?/p>

 

存在于蛋白质之间的微弱或暂时的相?/p>

作用?/p>

 (4

酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类?/p>

 

和分化时期材料构?/p>

 

cDNA 

文库

,

能分析细胞质、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功

 

能蛋

白?/p>

 (5 

通过

 mRNA 

产生多种稳定的酶使信号放大。同?/p>

,

酵母表型?/p>

 X-Gal 

?/p>

 

HIS3 

蛋白?/p>

 

达等检测方法均很敏感?/p>

 

酵母双杂交系统也具有一定的局限性?/p>

 

首先

, 

经典的双杂交系统分析蛋白间的

相互作用定位于细

 

胞核?/p>

, 

因而限制了该系统对某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋?/p>

的研究?/p>

 

酵母双杂交系统的另一个局

 

限性是

?/p>

假阳?/p>

?nbsp;

。在酵母双杂交系统建立的

初期阶段

,

由于仅仅采用

 

β

-

半乳糖苷酶这一单一的报?/p>

 

基因体系

,

这种报告基因的表

达往往不能十分严谨地被控制

,

因此容易产生假阳性。由于某些蛋白本

 

身具有激?/p>

转录的功能或在酵母中表达时发挥转录激活作?/p>

, 

?/p>

 DNA 

结合结构域融合蛋白在

无特?/p>

 

激活结构域的情况下也可被激活转录?/p>

 

另外某些蛋白表面含有对多种蛋?

Ͼλ">
Ͼλ
Ŀ

酵母双杂交实验流?? - 百度文库
新建
上传
首页
助手
最?/div>
资料?/div>
工具

模块?/p>

 

蛋白质之间的相互作用

 

1. 

实验目的

 

本实验以重组质粒和酵母细胞为材料

, 

学习检测蛋白质相互作用的基本原理和

技术方法?/p>

 

主要?/p>

 

绍酵母双杂交的基本原理与操作技?/p>

; 

让学生了解和掌握酵母

双杂交系统的应用

; 

掌握酵母感受态的

 

制备的基本原理和主要的操作步骤?/p>

 

2. 

实验原理

 

1989

?/p>

 Fields 

?/p>

 Song 

等人根据当时人们对真核生物转录起始过程调控的认识

(

即细胞内基因?/p>

 

录的起始需要转录激活因子的参与

 ,

提出并建立了酵母双杂交系

统。该系统作为发现和研究活细胞

 

体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技?/p>

平台

,

近几年得到了广泛的运用和发展?/p>

 

相比于其它蛋白质筛选系?/p>

,

酵母双杂交系统具有以下优?/p>

:(1

检测在真核活细

胞内进行

,

?/p>

 

一定程度上代表细胞内的真实情况?/p>

 (2

作用信号是在融合基因表达?/p>

,

在细胞内重建转录因子的作

 

用而给出的

,

省去了纯化蛋白质的繁琐步骤?/p>

 (3

检测结

果是基因表达产物的积累效?/p>

,

因而可检?/p>

 

存在于蛋白质之间的微弱或暂时的相?/p>

作用?/p>

 (4

酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类?/p>

 

和分化时期材料构?/p>

 

cDNA 

文库

,

能分析细胞质、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功

 

能蛋

白?/p>

 (5 

通过

 mRNA 

产生多种稳定的酶使信号放大。同?/p>

,

酵母表型?/p>

 X-Gal 

?/p>

 

HIS3 

蛋白?/p>

 

达等检测方法均很敏感?/p>

 

酵母双杂交系统也具有一定的局限性?/p>

 

首先

, 

经典的双杂交系统分析蛋白间的

相互作用定位于细

 

胞核?/p>

, 

因而限制了该系统对某些细胞外蛋白和细胞膜受体蛋?/p>

的研究?/p>

 

酵母双杂交系统的另一个局

 

限性是

?/p>

假阳?/p>

?nbsp;

。在酵母双杂交系统建立的

初期阶段

,

由于仅仅采用

 

β

-

半乳糖苷酶这一单一的报?/p>

 

基因体系

,

这种报告基因的表

达往往不能十分严谨地被控制

,

因此容易产生假阳性。由于某些蛋白本

 

身具有激?/p>

转录的功能或在酵母中表达时发挥转录激活作?/p>

, 

?/p>

 DNA 

结合结构域融合蛋白在

无特?/p>

 

激活结构域的情况下也可被激活转录?/p>

 

另外某些蛋白表面含有对多种蛋?



ļ׺.doc޸Ϊ.docĶ

  • Сѧ˽꼶ѧдλ
  • ˼HI3531 4·SDI 1080Pʹֲ
  • ͳ
  • ҽۺϿо
  • ˮ鸴ϰ⼰
  • snmpѧϰĵĵ
  • LC5ϵͳװָV1.1
  • 꼶Ӣ16ϰ
  • ˽̰꼶ѧϲз̽Ӧϰ30
  • ѧ

վ

԰ Ͼλ
ϵͷ779662525#qq.com(#滻Ϊ@)