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2019
最新浙科版生物选修
1
实验
1
《大肠杆菌的培养和分
离》教æ¡?/p>
——基础知识和操作过程梳ç�?/p>
一、大肠杆è�?/p>
细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无æˆ?/p>
型的细胞æ ?/p>
,
细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同
,
细菌可分为革兰氏阳性菌和革
兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚
,
无荚è†?/p>
,
多产生外毒素;革兰氏阴性菌细胞壁薄
,
有荚è†?/p>
,
多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感ã€?/p>
大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道中一般对人无å®?/p>
,
但任何大
肠杆菌进入人的泌尿系ç»?/p>
,
都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用
,
它的质粒是最常用的运载体
,
它也是基因工程中常用的受体细胞ã€?/p>
二、培养基配置
微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化
合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机ç‰?/p>
,
但不一定需
要外界补å…?/p>
,
有的微生物可以自身合成。在提供上述几种主要营养物质的基础ä¸?/p>
,
培养基还需
要满足微生物生长å¯?/p>
pH
、特殊营养物质以及氧气的要求ã€?/p>
我们一般用
LB
液体培养基来扩大培养大肠杆菌
,
培养后可åœ?/p>
LB
固体培养基上划线åˆ?/p>
离。以下为本实验中培养基配置步骤:
1
.称量:准确称取各成分。蛋ç™?/p>
�/p>
0.5g
,
酵母提取ç‰?/p>
0.
25g
,
氯化é’?/p>
0.5g
,
加水
50ml
�/p>
配置
LB
固体培养基时还需åŠ?/p>
1g
琼脂
2
.溶化:加热熔化
,
用蒸馏水定容åˆ?/p>
50mL
。配ç½?/p>
LB
固体培养基时还需加琼è„?/p>
,
整个è¿?/p>
程不断用玻棒搅拌
,
目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂ã€?/p>
3
.调
pH
:用
1mol/L NaOH
溶液调节
pH
至偏碱性ã€?/p>
4
.灭菌:在两ä¸?/p>
250ml
的三角瓶中分别装å…?/p>
50ml LB
液体培养基和
50ml LB
固体培养
�/p>
,
加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包å¥?/p>
,
放入灭菌锅内
,
1kg
压力灭菌
15min
�/p>
5
.倒平板:灭菌å�?/p>
,
待固体培养基冷却è‡?/p>
60
℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其
过程是:①将灭过菌的培养皿放在火焰旁
,
右手拿装有培养基的三角瓶
,
左手拔出棉塞;②å�?/p>
手拿三角ç“?/p>
,
使三角瓶的瓶口迅速通过火焰;③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口çš?/p>
缝隙
,
右手将培养基倒入培养çš?/p>
,
立刻盖上皿盖;④待平板冷却凝固后
,
将平板倒过来放置ã€?/p>
倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中
转移已灭菌的培养基时
,
也不要把培养基沾在皿壁上。否åˆ?/p>
,
空气中杂菌会在这些粘附培养基
上繁æ®?/p>
,
并污染皿内培养基ã€?/p>
三、灭菌和消毒
1
.无菌技术:①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;②将培养å™?/p>
皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌;③为避免周围微生物污染
,
实验操作应在酒精灯火
焰旁进行;④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触ã€?/p>
2
.消毒方法:â‘?/p>
日常生活经常用到的是煮沸消毒法;②对一些不耐高温的液体
,
则使
用巴氏消毒法;③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强
消毒效果
,
然后使用紫外线进行物理消毒;④实验操作者的双手使用酒精进行消毒
3
.灭菌方法:①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法;②培养基、无菌水等使
用高
压蒸汽灭菌法
,
所用器æ¢?/p>
是高压蒸汽灭菌锅;③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭
菌法
,
所用器械是紫外灯ã€?
4
.比较消毒和灭菌ï¼?/p>