TGEV
单克隆抗体的制备及检测方法的建立
猪传染性胃肠炎ï¼?/p>
Transmissible gastroenteritis of pigs,TGE
)是由猪传染性胃肠炎
病毒ï¼?/p>
Transmissible Gastroenteritis virus of swine,TGEV
)引起的一种高度接触性的æ¶?/p>
化道传染性疾ç—?/p>
,
多发于冬春季
,
主要临床症状为腹泻和呕吐
,
仔猪感染后死亡率达到
70%
ä»?/p>
�/p>
,
造成了严重的经济损失。因æ?/p>
,
在感染初期对
TGE
快速准确的诊断
,
是至关重要的ã€?/p>
通过å¯?/p>
TGE
抗原和抗体检测方法的研究
,
可以更好的防控疫情ã€?/p>
本实验通过超速离心和
蔗糖密度梯度离心å¯?/p>
TGEV
进行纯化
,
免疫
BALB/c
小鼠
,
三次免疫后细胞融å�?/p>
,
通过间接
ELISA
法筛选阳性的杂交瘤细èƒ?/p>
,
并用有限稀释法对阳性细胞进行克éš?/p>
,4
次亚克隆后获得稳
定分泌抗体的杂交瘤细胞株
,
分别ä¸?/p>
3G11
�/p>
1D6
�/p>
2E5
å’?/p>
5D1
�/p>
通过
Western blot
发现
4
株单抗均是特异性针å¯?/p>
TGEV-N
蛋白
;4
株细胞中
,3G11
�/p>
2E5
å’?/p>
5D1
的亚类均ä¸?/p>
IgG<sub>1</sub>,1D6
的亚类为
IgM;
间接免疫荧光实验鉴定
4
株单抗均能与感染
TGEV
的细胞结å�?/p>
;
特异性反应实验中
,4
株单抗与猪流行性腹泻病æ¯?/p>
ï¼?/p>
PEDV
ï¼?/p>
、猪轮状病毒ï¼?/p>
PRV
)和
II
型猪圆环病毒ï¼?/p>
PCV2
)均不反应。用
BALB/c
小鼠åˆ?/p>
�/p>
3G11
单抗细胞的腹æ°?/p>
,
通过纯化柱对腹水进行纯化
,
测定效价ä¸?/p>
10<sup>5</sup>
�/p>
用实验室保存çš?/p>
TGEV-N
蛋白单抗
E10F10D5
和本研究制备çš?/p>
3G11
单抗建立了双æŠ?/p>
体夹å¿?/p>
ELISA
检测方法ã€?/p>
与传统的双抗体夹å¿?/p>
ELISA
相比
,
本实验将检测抗ä½?/p>
3G11
�/p>
HRP
进行偶联
,
省去了酶标二抗的孵育
,
减少了操作步骤和时间ã€?/p>
通过对反应条件的摸索和优åŒ?/p>
,
确定了当
E10F10D5
单抗包被浓度ä¸?/p>
4
μ
g/mL,HRP-3G11
单抗工作浓度ä¸?/p>
1
�/p>
800
稀释时
,
检测效果最佳。而且处理粪便样品æ—?/p>
,
�/p>
需要加入病毒裂解液
,
只需混匀冻融即可ã€?/p>