RD
人恶性胚胎横纹肌瘤细胞培养操?/p>
1
)复苏细?/p>
:将含有
1mL
细胞悬液的冻存管?/p>
37
℃水浴中迅速摇
晃解冻,
加入
4mL
培养基混合均匀?/p>
?/p>
1000RPM
条件下离?/p>
4
?/p>
钟,弃去上清液,?/p>
1-2mL
培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加
入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入
10cm
皿中,加入约
8ml
培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度?/p>
2
)细胞传?/p>
:如果细胞密度达
80%-90%
,即可进行传代培养?/p>
1.
弃去培养上清,用不含钙、镁离子?/p>
PBS
润洗细胞
1-2
次?/p>
2.
?/p>
1ml
消化液(
0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA
)于培养瓶中?/p>
置于
37
℃培养箱中消?/p>
1-2 min
?/p>
然后在显微镜下观察细胞消化情况,
若细胞大部分变圆并脱落,
迅速拿回操作台?/p>
轻敲几下培养瓶后加少
量培养基终止消化?/p>
3.
?/p>
6-8ml/
瓶补加培养基?/p>
轻轻打匀后吸出,
?/p>
1000RPM
条件
下离?/p>
4 min
,弃去上清液,补?/p>
1-2mL
培养液后吹匀?/p>
4.
将细胞悬液按
1
?/p>
2
比例分到新的?/p>
8ml
培养基的新皿中或
者瓶中?/p>
3
?/p>
细胞冻存
?/p>
待细胞生长状态良好时?/p>
可进行细胞冻存?/p>
下面
T25
?/p>
为类?/p>
1.
细胞冻存时,
弃去培养基后?/p>
PBS
清洗一遍后加入
1ml
胰酶?/p>
细胞变圆脱落后,加入
1ml
含血清的培养基终止消化,可使用血?/p>
计数板计数?/p>