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人恶性胚胎横纹肌瘤细胞培养操?/p>

 

1

)复苏细?/p>

:将含有

 

1mL 

细胞悬液的冻存管?/p>

 

37

℃水浴中迅速摇

晃解冻,

加入

 

4mL 

培养基混合均匀?/p>

?/p>

1000RPM 

条件下离?/p>

 

4 

?/p>

钟,弃去上清液,?/p>

 

1-2mL 

培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加

入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入

 

10cm 

皿中,加入约

 

8ml 

培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度?/p>

 

2

)细胞传?/p>

:如果细胞密度达

 

80%-90%

,即可进行传代培养?/p>

 

  

  

 1. 

弃去培养上清,用不含钙、镁离子?/p>

 

PBS 

润洗细胞

 

1-2 

次?/p>

 

  

  

 2. 

?/p>

 

1ml 

消化液(

0.25%Trypsin-0.53mM 

EDTA

)于培养瓶中?/p>

置于

 

37

℃培养箱中消?/p>

 

1-2 min

?/p>

然后在显微镜下观察细胞消化情况,

若细胞大部分变圆并脱落,

迅速拿回操作台?/p>

轻敲几下培养瓶后加少

量培养基终止消化?/p>

 

  

  

 3. 

?/p>

 

6-8ml/

瓶补加培养基?/p>

轻轻打匀后吸出,

?/p>

1000RPM 

条件

下离?/p>

 

4 min

,弃去上清液,补?/p>

 

1-2mL 

培养液后吹匀?/p>

 

  

  

 4. 

将细胞悬液按

 

1

?/p>

2 

比例分到新的?/p>

 

8ml 

培养基的新皿中或

者瓶中?/p>

 

3

?/p>

细胞冻存

?/p>

待细胞生长状态良好时?/p>

可进行细胞冻存?/p>

下面

 

T25 

?/p>

为类?/p>

 

1. 

细胞冻存时,

弃去培养基后?/p>

PBS 

清洗一遍后加入

 

1ml 

胰酶?/p>

细胞变圆脱落后,加入

 

1ml 

含血清的培养基终止消化,可使用血?/p>

计数板计数?/p>

 

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人恶性胚胎横纹肌瘤细胞培养操?/p>

 

1

)复苏细?/p>

:将含有

 

1mL 

细胞悬液的冻存管?/p>

 

37

℃水浴中迅速摇

晃解冻,

加入

 

4mL 

培养基混合均匀?/p>

?/p>

1000RPM 

条件下离?/p>

 

4 

?/p>

钟,弃去上清液,?/p>

 

1-2mL 

培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加

入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入

 

10cm 

皿中,加入约

 

8ml 

培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度?/p>

 

2

)细胞传?/p>

:如果细胞密度达

 

80%-90%

,即可进行传代培养?/p>

 

  

  

 1. 

弃去培养上清,用不含钙、镁离子?/p>

 

PBS 

润洗细胞

 

1-2 

次?/p>

 

  

  

 2. 

?/p>

 

1ml 

消化液(

0.25%Trypsin-0.53mM 

EDTA

)于培养瓶中?/p>

置于

 

37

℃培养箱中消?/p>

 

1-2 min

?/p>

然后在显微镜下观察细胞消化情况,

若细胞大部分变圆并脱落,

迅速拿回操作台?/p>

轻敲几下培养瓶后加少

量培养基终止消化?/p>

 

  

  

 3. 

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6-8ml/

瓶补加培养基?/p>

轻轻打匀后吸出,

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1000RPM 

条件

下离?/p>

 

4 min

,弃去上清液,补?/p>

 

1-2mL 

培养液后吹匀?/p>

 

  

  

 4. 

将细胞悬液按

 

1

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2 

比例分到新的?/p>

 

8ml 

培养基的新皿中或

者瓶中?/p>

 

3

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细胞冻存

?/p>

待细胞生长状态良好时?/p>

可进行细胞冻存?/p>

下面

 

T25 

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为类?/p>

 

1. 

细胞冻存时,

弃去培养基后?/p>

PBS 

清洗一遍后加入

 

1ml 

胰酶?/p>

细胞变圆脱落后,加入

 

1ml 

含血清的培养基终止消化,可使用血?/p>

计数板计数?/p>

 

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人恶性胚胎横纹肌瘤细胞培养操?/p>

 

1

)复苏细?/p>

:将含有

 

1mL 

细胞悬液的冻存管?/p>

 

37

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晃解冻,

加入

 

4mL 

培养基混合均匀?/p>

?/p>

1000RPM 

条件下离?/p>

 

4 

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钟,弃去上清液,?/p>

 

1-2mL 

培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加

入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入

 

10cm 

皿中,加入约

 

8ml 

培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度?/p>

 

2

)细胞传?/p>

:如果细胞密度达

 

80%-90%

,即可进行传代培养?/p>

 

  

  

 1. 

弃去培养上清,用不含钙、镁离子?/p>

 

PBS 

润洗细胞

 

1-2 

次?/p>

 

  

  

 2. 

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1ml 

消化液(

0.25%Trypsin-0.53mM 

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置于

 

37

℃培养箱中消?/p>

 

1-2 min

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然后在显微镜下观察细胞消化情况,

若细胞大部分变圆并脱落,

迅速拿回操作台?/p>

轻敲几下培养瓶后加少

量培养基终止消化?/p>

 

  

  

 3. 

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6-8ml/

瓶补加培养基?/p>

轻轻打匀后吸出,

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条件

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4 min

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 4. 

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1

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2 

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待细胞生长状态良好时?/p>

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1. 

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清洗一遍后加入

 

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RD细胞复苏、传代、冻?- 百度文库
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人恶性胚胎横纹肌瘤细胞培养操?/p>

 

1

)复苏细?/p>

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37

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1000RPM 

条件下离?/p>

 

4 

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钟,弃去上清液,?/p>

 

1-2mL 

培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加

入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入

 

10cm 

皿中,加入约

 

8ml 

培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度?/p>

 

2

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:如果细胞密度达

 

80%-90%

,即可进行传代培养?/p>

 

  

  

 1. 

弃去培养上清,用不含钙、镁离子?/p>

 

PBS 

润洗细胞

 

1-2 

次?/p>

 

  

  

 2. 

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1ml 

消化液(

0.25%Trypsin-0.53mM 

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置于

 

37

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1-2 min

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然后在显微镜下观察细胞消化情况,

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量培养基终止消化?/p>

 

  

  

 3. 

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6-8ml/

瓶补加培养基?/p>

轻轻打匀后吸出,

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1000RPM 

条件

下离?/p>

 

4 min

,弃去上清液,补?/p>

 

1-2mL 

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 4. 

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下面

 

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1. 

细胞冻存时,

弃去培养基后?/p>

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清洗一遍后加入

 

1ml 

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1ml 

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