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叶绿素含量的测定
一、原?/p>
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收?/p>
利用分光光度计在某一特定波长测定其吸?/p>
度,
即可用公式计算出提取液中各色素的含量?/p>
根据朗伯
?/p>
比尔定律,某有色溶液的吸
光度
A
与其中溶质浓?/p>
C
和液层厚?/p>
L
成正比,?/p>
A
?/p>
α
CL
式中?/p>
α
比例常数。当溶液
浓度以百分浓度为单位,液层厚度为
1cm
时,
α
为该物质的吸光系数。各种有色物质溶
液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求
得?/p>
如果溶液中有数种吸光物质?/p>
则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在?/p>
应波长下吸光度的总和?/p>
这就是吸光度的加和性?/p>
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶
绿素
a
?/p>
b
和类胡萝卜素的含量,只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度
A
,并
根据叶绿?/p>
a
?/p>
b
及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿?/p>
a
?/p>
b
时为了排除类胡萝卜素的干扰,所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸
收峰?/p>
二、材料、仪器设备及试剂
(一)材料:新鲜(或烘干)的植物叶片?/p>
(二)仪器设备:
1.
分光光度计;
2.
电子顶载天平(感?/p>
0.01g
?/p>
?/p>
3.
研钵?/p>
4.
?/p>
色容量瓶?/p>
5.
小漏斗;
6.
定量滤纸?/p>
7.
吸水纸;
8.
擦境纸;
9.
滴管?/p>
(三)试剂:
96
%乙醇(?/p>
80
%丙酮)
;石英砂;碳酸钙粉?/p>
三、实验步?/p>
1.
取新鲜植物叶片(或其它绿色组织)或干材料,擦净组织表面污物,剪碎(去掉?/p>
脉)
,混匀?/p>
2.
称取剪碎的新鲜样?/p>
0.2g
,共
3
份,分别放入研钵中,加少量石英砂
和碳酸钙粉及
2
?/p>
3ml95
%乙醇,研成均浆,再加乙?/p>
10ml
,继续研磨至组织变白。静
?/p>
3
?/p>
5min
?/p>
3.
取滤?/p>
1
张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,
过滤?/p>
25ml
棕色容量瓶中,用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一
起倒入漏斗中?/p>
4.
用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直?/p>
滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容?/p>
25ml
,摇匀?/p>
5.
把叶绿体色素提取液?/p>
入光?/p>
1cm
的比色杯内。以
95
%乙醇为空白,在波长
665nm
?/p>
649nm
下测定吸光度?/p>
四、实验结果计算:将测定得到的吸光值代入下面的式子?/p>
Ca=13.95A
665
?/p>
6.88A
649
?/p>
Cb=24.96A
649
?/p>
7.32A
665
。据此即可得到叶绿素
a
和叶绿素
b
的浓度(
Ca
?/p>
Cb
?/p>
mg/L
?/p>
?/p>
二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量?/p>
叶绿素的含量?/p>
mg/g
?/p>
=
[
叶绿素的浓度
×
提取液体?/p>
×
稀释倍数
]/
样品鲜重(或干重?/p>
?/p>