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1

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3

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离子交换柱层析分离与纯化凝集?/p>

 

 

一、实验目?/p>

 

本实验以红花石蒜为材料,

将其粗提液进行硫酸铵沉淀后,

再用离子交换柱层析进行分

离?/p>

本实验的目的是:

了解离子交换层析技术的原理?/p>

掌握用离子交换层析技术分离蛋白质

的基本技术?/p>

 

二、实验原?/p>

 

离子交换层析分离蛋白质的过程

,

主要是利用蛋白质具有不同的电荷而进行分离?/p>

依靠?/p>

加缓冲液中的离子强度或改?/p>

pH

值使蛋白质带不同种类和数目的电荷?/p>

改变蛋白质与离子?/p>

换剂的结合状?/p>

,

从而使不同的蛋白质得以分离。要成功地分离某种混合物,必须根据其所

含物质的解离性质?/p>

带电状态选择适当类型的离子交换剂?/p>

并控制吸附和洗脱条件

(主要是

洗脱液的离子强度?/p>

pH

值)

,使混合物中各组分按亲和力大小顺序依次从层析柱中洗脱?/p>

来?/p>

 

离子交换剂是连接有离子基团的不溶性惰性颗粒,可由多种材料制成

,

如纤维素

,

葡聚?/p>

凝胶

,

琼脂糖凝胶和合成树脂。常用于蛋白质分离纯化的离子交换剂为离子交换纤维?/p>

,

离子

交换葡聚糖凝胶和离子交换琼脂糖凝胶。带正电荷的离子交换剂可以靠静电结合阴离子,?/p>

为阴离子交换剂。带负电荷的离子交换剂称为阳离子交换剂。离子交换剂根据带电基团解离

程度的不?/p>

,

又有强弱之分。强离子交换剂的带电基团在所?/p>

pH

范围内解离;弱离子交换剂

的带电基团的解离状态则取决?/p>

pH

,只在一?/p>

pH

范围内解离?/p>

 

 

 

 

 

本实验采用的凝胶柱为

DEAE-Sephrose

阴离子交换琼脂糖凝胶柱?/p>

 

三、试剂与器材

 

主要试剂?/p>

弱碱型阴离子交换琼脂糖凝胶:

DEAE-Sephrose

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NaOH

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NaCl

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Tris

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盐酸?/p>

乙醇?/p>

 

 

主要溶液?/p>

 

生理盐水?/p>

0.5M NaOH

溶液?/p>

0.05M, 

pH7.6 

Tris-HCl

缓冲液?/p>

0.05M, 

pH7.6 

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1M 

NaCl

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Tris-HCl

缓冲?/p>

 

主要器材?/p>

 

离子交换层析柱、储液瓶、梯度洗脱仪、紫外检测仪和记录仪、部分收集器?/p>

pH

计?/p>

恒流泵、透析?/p>

 

四、试剂配?/p>

 

1

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母液

 

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M

r

=121.14

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称量

60.57g 

Tris

,加?/p>

400ml

蒸馏水将粉末溶解后,加入适量盐酸?/p>

pH

值至

7.6

,最后定

容至

1L 

 

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离子交换柱层析分离与纯化凝集?/p>

 

 

一、实验目?/p>

 

本实验以红花石蒜为材料,

将其粗提液进行硫酸铵沉淀后,

再用离子交换柱层析进行分

离?/p>

本实验的目的是:

了解离子交换层析技术的原理?/p>

掌握用离子交换层析技术分离蛋白质

的基本技术?/p>

 

二、实验原?/p>

 

离子交换层析分离蛋白质的过程

,

主要是利用蛋白质具有不同的电荷而进行分离?/p>

依靠?/p>

加缓冲液中的离子强度或改?/p>

pH

值使蛋白质带不同种类和数目的电荷?/p>

改变蛋白质与离子?/p>

换剂的结合状?/p>

,

从而使不同的蛋白质得以分离。要成功地分离某种混合物,必须根据其所

含物质的解离性质?/p>

带电状态选择适当类型的离子交换剂?/p>

并控制吸附和洗脱条件

(主要是

洗脱液的离子强度?/p>

pH

值)

,使混合物中各组分按亲和力大小顺序依次从层析柱中洗脱?/p>

来?/p>

 

离子交换剂是连接有离子基团的不溶性惰性颗粒,可由多种材料制成

,

如纤维素

,

葡聚?/p>

凝胶

,

琼脂糖凝胶和合成树脂。常用于蛋白质分离纯化的离子交换剂为离子交换纤维?/p>

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交换葡聚糖凝胶和离子交换琼脂糖凝胶。带正电荷的离子交换剂可以靠静电结合阴离子,?/p>

为阴离子交换剂。带负电荷的离子交换剂称为阳离子交换剂。离子交换剂根据带电基团解离

程度的不?/p>

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又有强弱之分。强离子交换剂的带电基团在所?/p>

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的带电基团的解离状态则取决?/p>

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本实验采用的凝胶柱为

DEAE-Sephrose

阴离子交换琼脂糖凝胶柱?/p>

 

三、试剂与器材

 

主要试剂?/p>

弱碱型阴离子交换琼脂糖凝胶:

DEAE-Sephrose

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主要器材?/p>

 

离子交换层析柱、储液瓶、梯度洗脱仪、紫外检测仪和记录仪、部分收集器?/p>

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恒流泵、透析?/p>

 

四、试剂配?/p>

 

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离子交换柱层析分离与纯化凝集?/p>

 

 

一、实验目?/p>

 

本实验以红花石蒜为材料,

将其粗提液进行硫酸铵沉淀后,

再用离子交换柱层析进行分

离?/p>

本实验的目的是:

了解离子交换层析技术的原理?/p>

掌握用离子交换层析技术分离蛋白质

的基本技术?/p>

 

二、实验原?/p>

 

离子交换层析分离蛋白质的过程

,

主要是利用蛋白质具有不同的电荷而进行分离?/p>

依靠?/p>

加缓冲液中的离子强度或改?/p>

pH

值使蛋白质带不同种类和数目的电荷?/p>

改变蛋白质与离子?/p>

换剂的结合状?/p>

,

从而使不同的蛋白质得以分离。要成功地分离某种混合物,必须根据其所

含物质的解离性质?/p>

带电状态选择适当类型的离子交换剂?/p>

并控制吸附和洗脱条件

(主要是

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,使混合物中各组分按亲和力大小顺序依次从层析柱中洗脱?/p>

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离子交换剂是连接有离子基团的不溶性惰性颗粒,可由多种材料制成

,

如纤维素

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,

琼脂糖凝胶和合成树脂。常用于蛋白质分离纯化的离子交换剂为离子交换纤维?/p>

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为阴离子交换剂。带负电荷的离子交换剂称为阳离子交换剂。离子交换剂根据带电基团解离

程度的不?/p>

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又有强弱之分。强离子交换剂的带电基团在所?/p>

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本实验采用的凝胶柱为

DEAE-Sephrose

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三、试剂与器材

 

主要试剂?/p>

弱碱型阴离子交换琼脂糖凝胶:

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初中九年?初三)化学 离子交换柱层析分离与纯化石蒜球茎凝集?- 百度文库
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离子交换柱层析分离与纯化凝集?/p>

 

 

一、实验目?/p>

 

本实验以红花石蒜为材料,

将其粗提液进行硫酸铵沉淀后,

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本实验的目的是:

了解离子交换层析技术的原理?/p>

掌握用离子交换层析技术分离蛋白质

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二、实验原?/p>

 

离子交换层析分离蛋白质的过程

,

主要是利用蛋白质具有不同的电荷而进行分离?/p>

依靠?/p>

加缓冲液中的离子强度或改?/p>

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值使蛋白质带不同种类和数目的电荷?/p>

改变蛋白质与离子?/p>

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从而使不同的蛋白质得以分离。要成功地分离某种混合物,必须根据其所

含物质的解离性质?/p>

带电状态选择适当类型的离子交换剂?/p>

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离子交换剂是连接有离子基团的不溶性惰性颗粒,可由多种材料制成

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如纤维素

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琼脂糖凝胶和合成树脂。常用于蛋白质分离纯化的离子交换剂为离子交换纤维?/p>

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离子

交换葡聚糖凝胶和离子交换琼脂糖凝胶。带正电荷的离子交换剂可以靠静电结合阴离子,?/p>

为阴离子交换剂。带负电荷的离子交换剂称为阳离子交换剂。离子交换剂根据带电基团解离

程度的不?/p>

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又有强弱之分。强离子交换剂的带电基团在所?/p>

pH

范围内解离;弱离子交换剂

的带电基团的解离状态则取决?/p>

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本实验采用的凝胶柱为

DEAE-Sephrose

阴离子交换琼脂糖凝胶柱?/p>

 

三、试剂与器材

 

主要试剂?/p>

弱碱型阴离子交换琼脂糖凝胶:

DEAE-Sephrose

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主要器材?/p>

 

离子交换层析柱、储液瓶、梯度洗脱仪、紫外检测仪和记录仪、部分收集器?/p>

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四、试剂配?/p>

 

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