一．Western blot实验所需试剂配制方法
制胶试剂：
1. 30％（W/V）丙烯酰胺溶液：
名称 Acrylamide N-甲叉双丙烯酰胺 (N，N-methylene-bisacylamide，BIS) 去离子水 用量 29g 1g 80ml 备注 充分搅拌溶解 定容至100ml，0.45μm滤膜过滤除杂，置于棕色瓶中4℃保存， （注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，通过皮肤吸收并具有累积性，配制时应戴手套操作）
2. 10％（W/V）过硫酸铵：
名称 过硫酸铵 去离子水 用量 0.1g 1ml 备注 现配现用 （注意：10％过硫酸铵溶液在4℃保存能使用两周左右，过期会失去催化效果）
3. 1M Tris-HCL, pH=6.8 (36%的浓盐酸) ：
名称 Tris 去离子水 浓盐酸 去离子水 用量 12.1 80ml 备注 8.8-9ml 预实验已确定 加入去离子水定容至100ml后，室温保存
4. 1.5M Tris-HCL, pH=8.8 (36%的浓盐酸) ：
名称 Tris 去离子水 浓盐酸 去离子水
用量 18.17 80ml 备注 2.8-3ml 预实验已确定 加入去离子水定容至100ml后，室温保存 5. 10%SDS：
名称 SDS 去离子水 用量 10g 80ml 备注 加入去离子水定容至100ml后，室温保存 缓冲液配置：
6. 5ⅹTris-Glycine Buffer(SDS-PAGE电泳缓冲液)
名称 Tris Glycine SDS 去离子水 用量 15.1g 94.0g 5.0g 800ml 备注 pH=8.3 加入去离子水定容至1L后，室温保存 7. 1ⅹ膜转移缓冲液：
名称 Glycine Tris SDS 甲醇 去离子水 2.9g 5.8g 0g 用前加200ml甲醇 定容到1000ml 用量 2.9g 5.8g 0.37g 用前加200ml甲醇 定容到1000ml 备注 室温保存 8. 1ⅹ膜转移缓冲液：
名称 Glycine Tris SDS 甲醇 去离子水 2.9g 5.8g 0g 用前加200ml甲醇 定容到1000ml 用量 2.9g 5.8g 0.37g 用前加200ml甲醇 定容到1000ml 备注 室温保存 9. 5×SDS-PAGE Loading Buffer：
名称 1MTris-HCL, pH=6.8 SDS 甘油 BPB（溴酚蓝） 超纯水 用量 1.25ml 0.5g 2.5ml 25mg 至5ml 备注 分装200ul/管 2.5ml 1g 5ml 50mg 10ml 2ME 50℃充分溶解， 30min，离心取上清，0.45uM过滤 10ul/200ul 使用前添加，添加后可室温保存一个月
10. 封闭缓冲液：
名称 脱脂奶粉 TBST 用量 5g 100ml 备注 充分溶解后， 4 ℃保存 其它：（备用）
11. 考马斯亮蓝R-250染色液：
名称 考马斯亮蓝R-250 异丙醇 冰醋酸 去离子水
用量 0.1g 25ml 10ml 65ml 备注 搅拌溶解 搅拌均匀 搅拌均匀，滤纸除去颗粒物，室温保存 12. 考马斯亮蓝染色脱色液：
名称 冰醋酸 甲醇 去离子水 用量 100ml 100ml 800ml 备注 充分混匀后使用
13. 2%的丽春红贮备液(20mL)：
名称 丽春红 三氯乙酸 磺基水杨酸 用量 5g 0.4g 6g 备注 充分溶解，定容20ml