实验三 维生素C注射液的处方考察及制备
一、目的与要求
1．通过维生素C注射液稳定性考察，熟悉注射剂处方设计的一般思路。 2. 掌握注射剂（水针）的制备方法与工艺。
3．熟悉影响易氧化药物稳定性的因素和提高药物稳定性的措施。 4. 熟悉注射剂的质量检查 二、内容与时间 序号 1 2 3 总计 内容 影响维生素C溶液稳定性的因素考察 维生素C注射液的制备 维生素C注射液的质量检查 时间（h） 5 4 3 12
三、原理与指导
注射剂系指将药物制成的供注入体内的无菌溶液、乳状液和混悬液以及供临用前配制成溶液或混悬液的无菌粉末。注射剂由于直接将药液注入人体血管或组织内，故药效迅速，剂量准确，且作用可靠，适用于抢救危重病人；对于不宜口服的药物，或不能口服给药的病人，注射剂能发挥其应有的疗效；对某些药物可定位给药，产生局部作用。注射剂的成品，要求无菌、无热原，澄明度和剂量合格，安全性和稳定性符合要求，pH值符合规定等。
注射剂的处方设计应根据剂型特点、主药的理化性质及临床使用要求，从制剂的稳定性(包括物理、化学及生物学稳定性)、安全性和有效性三个主要方面综合考虑，统筹兼顾，分清主、次因素，用科学方法进行原、辅料(品种、用量)的选择，同时还要考虑生产条件和成本等问题。本实验通过对维生素C注射液稳定性影响因素的考察，确定并设计处方，再按拟定的处方进行制备。
维生素C用于防治坏血病，促进创伤及骨折、预防冠心病等，临床应用十分广泛。维生素C在干燥状态下较稳定，但在潮湿状态或溶液中，其分子结构中的烯二醇结构被很快氧化，生成黄色双酮化合物，虽仍有药效，但会迅速进一步氧化、断裂，生成一系列有色的无效物质。其反应如下：
COOHOCOCHCOHH2O
抗坏血酸 去氢抗坏血酸
HOCHCH2OH2，3-二酮-L-古罗糖酸
COOHCOOHOHHHOOCCHCOHCH2OH +
草酸 L-丁糖酸
因此，维生素C注射液的处方设计应重点考虑如何延缓药物的氧化分解，以提高制剂的稳定性。维生素C的氧化过程常会受到溶液的pH值、氧、重金属离子和温度等因素的影响。通常延缓药物氧化分解可采用下列措施：（1）除氧，尽量减少药物与空气的接触，在配液和灌封中通入惰性气体（常用高纯度的氮气和二氧化碳）；（2）加抗氧剂；（3）调节溶液pH；（4）加金属离子络合剂。
为确保用药的安全、有效，生产注射剂的厂房、设施必须严格遵守《药品生产质理管理规范》(GMP)的各项规定。对灌、封等关键工序、场所应采用层流洁净空气技术，使微粒和细菌数控制在规定的范围内。配制注射液的原辅料、溶剂、容器等的质量经检查均应符合各有关规定。为保证剂量准确，对于生产过程中易降解的原料药，经过实验，可适当增加投料量。注射剂的制备工艺要合理，其灭菌方法，应根据灭菌的药物及其制剂的稳定性、制剂的规格进行正确选择。
注射剂生产流程如下：
原辅料 蒸馏水→重蒸馏水→注射用水 →配液→过滤→灌封→灭菌→检漏→擦瓶→灯检
空安瓿→（割圆）→洗涤→烘干
→质检→印字→包装
四、仪器与材料
仪器：烧杯，量筒，天平，具塞刻度试管，3号垂熔玻璃漏斗，安瓿(2m1)，电炉，pH计，灌注器，熔封机，酸式滴定管(25m1)，锥形瓶（50~250ml），洗瓶，可见分光光度计等。
材料：维生素C，碳酸氢钠，二氧化碳钢瓶，注射用水，亚甲蓝，0.001mol/LCuSO4溶液，Na2SO3，NaHSO3，Na2S2O3，Na2S2O5，盐酸半胱氨酸，0.1mol.L碘液，丙酮，稀醋酸，淀粉指示液等。 五、方法与步骤
（一）影响维生素C溶液稳定性的因素考察 1．加热时间的影响
取40m1注射用水，加维生素C 2.5g，分次加入碳酸氢钠约1.2g，边加边搅拌使完全溶解，添加注射用水至50m1，调节pH值为6.0，用0.22um的微孔滤膜过滤。分别量取滤液10ml于4支具塞试管中，放入沸水中煮沸，分别于0、15、30、60min时取出1支，冷却，以纯化水为空白对照，在420nm波长处测定各溶液的透光率，记录结果于表1，确定加热时间对维生素C稳定性的影响。
表1 加热时间对维生素C稳定性的影响 煮沸时间/min
0
透光率/%
-1
15 30 60
2．溶液pH值的影响
取维生素C 5g，加注射用水80ml溶解后，各量取16m1，分别加NaHCO3粉末调节溶液pH值为4.0、5.0、6.0、7.0(用pH计测定)，补加注射用水至20ml，再量取该液10ml装于具塞试管中（每pH值1支），做好标记，放入沸水中煮沸45min，取出，冷却，以纯化水为空白对照，在420nm波长处测定透光率，记录结果于表2。以pH值为横坐标，透光率为纵坐标作图，所得曲线最高处对应的pH值即为最稳pH值。
表2 pH值对维生素C稳定性的影响 pH值 4.0 5.0 6.0 7.0
3．抗氧剂种类的影响 取维生素C 6g，加注射用水96ml溶解后，加NaHCO3调节pH值为6.0。各量取该液16ml，按表3加入抗氧剂，补加注射用水至20ml，再量取该液10ml于试管中（每条件1支），做好标记，于沸水中煮沸45min。取出，冷却，以纯化水为空白对照，在420nm波长处测定透光率，记录结果于表3。
表3 抗氧剂对维生素C稳定性的影响
样品号 1 2 3 4 5
4．重金属离子的影响
取维生素C6g，加注射用水48ml溶解后，加NaHCO3调节pH值为6.0，再补加注射用水至60ml。分别量取该液10m1，按表4加入附加剂后，加注射用水稀释至20ml，再量取该液10ml于试管中（每条件1支），作好标记，放入沸水中煮沸45min。取出，冷却，以纯化水为空白对照，在420nm波长处测定透光率，记录结果于表4。
表4重金属离子对维生素C稳定性的影响 样品号 0 1 2 3
附加条件 /
0.001mol/LCuSO4 5ml 0.001mol/LCuSO4 2.5ml 0.001mol/LCuSO42.5ml +5íTA-2Na 1ml
透光率/%
抗氧剂（终浓度） Na2SO3 0.2% NaHSO3 0.2% Na2S2O3 0.2% Na2S2O5 0.2% 盐酸半胱氨酸 0.2%
透光率/%
透光率/%
4
（二） 维生素C注射液的制备
5% EDTA-2Na 2.5ml
1．处方 规格100mg：2ml。由学生根据实验（一）的考察结果拟订处方，交实验指导教师审定。
物料 用量 处方分析 维生素C 2.5g 主药 * * *
注射用水 加至50ml 溶剂
2．操作 由学生拟定，交实验指导教师审定。 （三）维生素C注射液质量检查
1. 澄明度检查：照《中国药典》2005年版二部附录XI H 可见异物检查法一：灯检法进行检查。除另有规定外，取供试品20支，除去容器标签，擦尽容器外壁，轻轻旋转和翻转容器使药液中存在的可见异物漂浮（注意不使药液产生气泡），置供试品于遮光板边缘处（光照度为1000~1500lx），在明视距离（通常25cm），分别在黑色和白色背景下，手持供试品颈部使药液轻轻翻转，用目检视。
20支供试品中，均不得检出可见异物，如检出可见异物的供试品不超过1支，应另取20支同法检查，均不得检出。
2. 装量：照《中国药典》2005年版二部附录注射剂通则方法检查。取2ml安瓿5支，开启时注意避免损失，将内容物分别用相应体积的干燥注射器及注射针头抽尽，然后注入经标化的量具内（量具的大小应使待测体积至少占其额定体积的40%），室温下检视，每支装量均不得少于其标示量。
3. pH值测定：应为5.0~7.0。
4. 颜色：照《中国药典》2005年版二部维生素C注射液项下测定。取本品（1ml中含维生素C50mg的溶液），照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处测定，吸光度不得过0.06。
5. 含量测定：照《中国药典》2005年版二部维生素C注射液项下测定，应为标示量的90.0%~110.0%。
精密量取样品液4ml，置150ml锥形瓶中，加蒸馏水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml,用碘液（0.1mol∕l）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒不褪。每1ml碘液（0.1mol∕l）相当于8.806mg的VC（C6H8O6）。
6. 热原：取本品按2005年版药典二部附录检查，剂量按家兔体重每1kg注射2ml，应符合规定。（此项免做）
7. 无菌：按中国药典2005年版二部附录检查，应符合规定。（此项免做） 六、结果与讨论
1. 记录影响维生素C溶液稳定性的考察结果，加以讨论，并拟订维生素注射液的处方和制
备工艺和操作流程。
2. 记录澄明度检查结果，并列于表5中。
表5 澄明度检查结果
检查总数/支
废品数/支
合格数/支
合格率/%
玻屑 纤维 白头 焦头 其他
七、思考题
1．影响药物氧化的因素有哪些？如何防止?
3. 将质量检查各项结果分别进行讨论。
总数
2．用NaHCO3调节维生素C注射液的pH值时，应注意什么问题？为什么？ 3．你设计的维生素C注射液处方有哪些理论或实验依据？ 4．何谓注射用水？制备时主要采用哪些方法和设备？ 5．影响注射剂澄明度的因素有哪些？
6. 为什么可以采用分光光度法检查颜色，目的是什么？