实验一 淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆及其葡萄糖值的测定
一、实验原理及目的：
淀粉可用酶法、酸法和酸酶法使淀粉水解成糊精、低聚糖和葡萄糖。淀粉糖浆或称液体葡萄糖（DE38-42），主要成分是葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖和糊精，是一种粘稠液体，甜味温和，极易为人体直接吸收，在饼干，糖果生产上广为应用。
双酶法水解淀粉制淀粉糖浆，是先以α-淀粉酶使淀粉中的α-1，4糖苷键水解生成小分子糊精、低聚糖和少量葡萄糖，然后再用糖化酶将糊精、低聚糖中的α-1，6糖苷键和α-1，4糖苷键切断，最后生成葡萄糖。
淀粉糖浆的分析方法是根据国家标准GB12099-89，采用菲林滴定法测定淀粉水解产品的葡萄糖值（DE），例如DE值为42，表示淀粉糖浆中含42%的葡萄糖。
本实验的目的：
（1）通过实验，了解淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆的基本原理。 （2）掌握淀粉双酶法制备淀粉糖浆的实验方法，以及酶的使用。 （3）熟悉淀粉水解产品的葡萄糖值测定方法。 二、实验材料、试剂与仪器
材料：马铃薯淀粉。
试剂：液化型α-淀粉酶（酶活力6000单位/g），糖化酶（酶活力为4-5万单位/g），菲林溶液A、B，亚甲基兰
指示剂，D-葡萄糖标准溶液。
（1）碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜(CuS04·5H2O)及0.05g亚甲基蓝，溶于水中并稀释至1000ml。 （2）碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，
用水稀释至1000ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（5）葡萄糖标准溶液：精密称取l.000g经过98~100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸，并以
水稀释至1000ml。此溶液每毫升相当于1mg葡萄糖。
仪器：150ml锥形瓶，容量瓶（25ml），移液管（1ml, 5ml, 20ml），100ml量筒，搅拌棒，恒温水浴锅，水浴摇
床，离心机，电炉子。
三、实验步骤
（一）淀粉糖浆的制备
2 g淀粉置于150ml锥形瓶中，加水50ml，搅拌均匀，配成淀粉浆，于95℃水浴上加热，并不断搅拌，使淀粉浆由开始糊化直到完全成糊，呈透明状。冷却淀粉糊到80℃以下，用2%的HCl调pH到5.5-7.5之间，添加0.2mlCaCl2作为酶的激活剂，加入液化型α-淀粉酶2mg(先溶于5ml蒸馏水中，再倒入糊化的淀粉中), 使温度保持在80℃（水浴摇床），搅拌20分钟使其液化。将锥形瓶移至电炉（隔石棉网）加热到至沸，翻腾灭活2分钟。4000 rpm离心5 min，将上层清液冷却至55℃，调pH到4.5左右，加入0.5ml糖化酶于65℃恒温水浴中糖化40min，反应完成后电炉加热至沸，翻腾灭酶2min，即为淀粉糖浆。再取2ml,定容到25ml，作为样品液待用。
（二）DE值的测定
（1）标定碱性酒石酸铜溶液：吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加水l0ml,从
滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，放置在电炉上，控制在2min内加热至沸，在电炉上趁沸以每两秒l滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10ml(甲、乙液各5m1)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)。 （2）样品溶液测定：吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，在电炉上控
制在2min内加热至沸，在电炉上趁沸以先快后慢的速度，从移液管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，蒸汽始终充满烧瓶，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。 DE?V葡m55?225?V样?1000?100
式中：DE—样品中葡萄糖的含量，％；
V葡——标定碱性酒石酸铜溶液平均消耗葡萄糖标准液的体积，11.75 ml； V样——测定时平均消耗样品液的体积，m1； 55——稀释样品的体积，m1； 2/25——取2ml样品液定容到25ml； m—样品质量，g 四、注意事项
1、试剂中含大量强碱NaOH，使用时小心；
2、电炉子加热一定要垫石棉网，防止锥形瓶受热不均而爆炸； 3、拿取锥形瓶时一定要带手套，防烫伤； 4、电炉子长时间不用时要断电；
5、酶的添加量直接决定了反应速度，移取时一定要准确； 6、离心转速很高，一定要带铁套平衡； 7、一定要将溶液冷却到最适温度附近再加酶； 8、先将水浴摇床转速调到最低再取放锥形瓶。 五、思考题
（1）为什么在测定DE值的整个滴定过程中，要保持沸腾，蒸汽始终充满烧瓶？ （2）除葡萄糖外，测定中与菲林试剂反应的糖还可能是那些糖，不可能是那些糖？