非无菌药品：实施新版GMP技术性问题答疑(421-636)
421、沉降菌检测用培养基的预培养温度、时间是否需与采样后的培养温度、时间一致，如也要求细菌用30-35℃培养3天，灭菌用23-28℃培养5天。（QT） 答：目前，我国对于预培养没有统一的规定。用于环境监控的培养基一般采用终端灭菌的培养基，建议根据《中国药典2010版》“微生物限度检查”要求处理，即细菌及控制菌用30-35℃培养3天，霉菌、酵母菌用23-28℃培养5天。预培养的目的是降低洁净环境中受污染的风险，理论上预培养时间越长越好，但不能由于预培养时间过长而影响到培养基支持微生物生长的能力。实际使用中还需对预培养后支持微生物生长能力进行测试。
422、纯蒸汽验证时的取样频次是多少？可否每天取样一次，连续取1周？或者每周仅对纯蒸汽总出口取样两次，其他点为每周取样一次，连续取3周？（QT） 答：提这一问题的企业比较多，这里说得较细一点。纯蒸汽系统与注射用水系统及纯化水系统完全不同，不需要用纯化水及注射用水初始验证的思维方法来考虑纯蒸汽的取样问题。纯蒸汽在每个主要使用点均安装疏水器，不存在循环回路，也不需要考虑连续3周的问题。在初始验证时，可在产汽口及各使用点取样，如果检查的结果均符合标准，第2-3次可只在产汽口及离纯蒸汽发生器最远端取样，检验合格即可。
检测的项目分为二类，一是物理项目，包括a)不冷凝气体；b)过热度；c)干燥度。现对物理项目作如下说明：
不冷凝气体--不冷凝气体（如空气、氮气）可以在蒸汽发生器出口夹在蒸汽中，将原本纯净的蒸汽、气相的水变成了蒸汽和气体的混合物。根据HTM 2010第3部的规定，每100毫升置换水中非冷凝气体体积不超过3.5毫升； 过热--根据HTM 2010第3部分给出的方法，过热值不超过25°C；
干燥值--干燥度是检测蒸汽中携带液相水的总量。例如，一个干燥值为95%的蒸汽，其释放的潜热量约为饱和蒸汽的95%。换言之，除了引起装载物过湿现象之外，蒸汽干燥度小于1时，其潜热也明显小于饱和蒸汽。干燥度值可以通过检测加以确定，所得的数值多为近似值。根据HTM 2010第3部分规定的方法，干燥值不低于0.9 (或，装载物为金属时，不低于0.95)。
化学项目则按美国药典要求测试，2008年的第31版美国药典在《纯蒸汽》中，要求对纯蒸汽的冷凝水检测以下项目： －微生物限度，同制药用水限度； －电导率，参考制药用水限度； －TOC：参考制药用水限度；
－细菌内毒素：0.25 EU/ml (适用于注射制剂)
许多企业在设计时没有考虑取样点，也没有购买测试仪，他们往往以贮罐或管路中收集冷凝水来替代对对纯蒸汽的取样，因为在线灭菌总是在清洗后才做，如果此时冷凝水达到了WFI的质量指标，那就OK了，这种方法也是可行的；如出现不合格时，就难以判别纯蒸汽发生器性能是否达标了（实际可能是清洗不当所致），因此，建议，用适当的纯化水取样器取样，以排除干扰因素的影响。 纯蒸汽发生器是一个比较稳定的设备，只要系统没有变更，通常结果的重现性很好，因此，纯蒸汽的常规监控可在灭菌器灭菌或在线灭菌时取样检验，常规监控的频率可根据风险及监测的结果来确定，例如，一般在开始时是一月一次，结果稳定时可适当延长，如一年一次。
参考文献：英国的HTM （Health Technical Memorandom）及USP。
423、微生物限度检查中的菌液制备需采用新鲜培养物，新鲜培养物是指每次传代后立即使用的菌液，还是菌种在其保存的有效期内均称为新鲜培养物？（QT） 答：微生物限度检查中的菌液制备采用的新鲜培养物，是指按照药典要求进行传代后一定时限内的菌液。具体可参看二部附录无菌检查法（附录104页）菌液制备要求。不是指传代后要立即使用的菌液。
424、问：生物制品原液生产过程中涉及多步过滤，是否需要做滤器的相容性试验？原液过滤和制剂过滤可否只选制剂过滤来做滤器的相容性？（QT） 答：按ICH（Q8、Q9、Q10）的要求，生物制品原液及制剂的相容性试验应是产品及工艺研发应完成的项目，不应拖到GMP中去考虑。如果在仿制产品过程中，不清楚采用什么样的过滤器会带来杂质的风险，那显然是一个不成熟的 产品及工艺。应当补做这样的试验。具体方法要看产品及工艺情况，例如，在制剂生产中，采用冗余过滤，因同一种过滤器不会有差异，没有必要在一次试验中，做每只过滤器的重复性试验。其它情况中，要按风险作具体分析。 425、企业校准人员资质的具体要求？（TZ-第五节）
答：对于执行国家地方及部门校准规范对计量设备进行校准的人员，可参加计量仪器校准人员考核，取得校验校准资格证书。对系统的管理要求及人员的技术性要求可参考：GAMP Good Practice Guide: Calibration Management 2002-01 426、分装中装量检测是否需要在专门的中控室进行，可否在分装间设专门的检测区？（QT）
答：粉针分装中装量检测操作有二种方法，绝大多数是手工法；另一种是自动在线测试法。采用手工法时，一般又按照称重法进行，可在分装间的B区设专门的检测区，将已称量好的瓶放置到生产线上分装后，再称量总重并计算其装量。 427、细胞培养过程中，中控取样可否由生产操作人员进行？（TZ-222）
答：取样操作是质量控制的活动之一，应是质量管理部门的职责。药品生产质量管理规范规定，质量管理部门的人员有权进入生产区和仓储区取样。经授权的取样人员应当是质量部门人员，可以是QA人员，也可以是QC人员，为了降低污染的风险，也可授权给经专门培训的生产人员，这应该通过风险评估来确定。 取样的关键是最大限度地降低取样过程中产生的污染和交叉污染，以及使样品具有代表性，这需要对取样操作人员进行较为完整的培训及考核，并应遵循详细的经QA/QC批准的取样SOP。
428、小容量非最终灭菌产品，安瓶干热灭菌Fh值大于1365的验证如何作？（按药典要求，干热灭菌温度250℃，时间要大于45分钟，目前干热灭菌柜中的过滤器无法承受300℃的高温，要Fh大于1365，就得降低温度，干燥箱中运行速度控制慢，效率太低，如何验证现行设备、工艺仍符合GMP要求）（QT） 答：首先，要将干热灭菌与去热原区分开来。其次，要搞清楚干热灭菌的基准温度是多少？按PDA技术报告的标准是170℃。国际技术参考资料上，干热灭菌的合格标准没有FH大于1365的提法，合格标准是经灭菌后，产品的微生物污染概率低于一百万分之一。由于安瓿空瓶是耐热的，可采用过度杀灭法，它能使对干热灭菌有很强耐热性的生物指示剂下降12个对数单位。举例来说，一个D170℃为2.5分钟的生物指示剂，要下降12个对数单位时，最低的FH值是30分钟。由于绝大多数的嗜热芽孢杆菌的D170℃值小于0.5 分钟，能使D170℃为2.5 分 钟的生物指示剂下降12个对数单位的FH值，将获得足够的安全余量，根本不需要达到1365。
去热原将使微生物的对数下降值大大超过10E100（100个对数单位），因此如去热原达到了要求（细菌内毒素下降3个对数单位），则生物指示剂试验就不需要做了。
参见：PDA技术报告No.3灭菌及去热原干热工艺的验证。
429、工艺用压缩空气管道系统定期消毒的可操作性？能否理解：选用的无油空压--经过干燥--三级过滤--确认后在和物料接触前端再加0.2um过滤后，管道系统定期消毒，只要对压缩空气品质监测评估即可。（QT）
答：所提到的处理方法基本都是这样，但要根据风险来讨论要求。经处理的压缩空气进生产区时，可能有二种情况，一种是用作动力源（平时不列入监控范围）；另一种是工艺或动力二者的结合（因简化管路而不将管路分得过细）。只有无菌药品的生产中，在分管路上才安装除菌过滤器，保证直接与药品或内包材接触的气体符合工艺要求，需要做的是定期检查除菌过滤器的完好性。工艺用压缩空气要检查含油量和微生物项目。
用于无菌生产（全无菌操作）的压缩空气，如冻干机平衡压力用的压缩空气，或用于压无菌药液的压缩空气等，过滤器与容器往往是做在线灭菌的，或部分软管与过滤器一起灭菌。